L-PGDS與內脂素在人股動脈粥樣硬化斑塊組織中的表達及意義.pdf

1、研究背景與目的：
　　外周動脈疾?。≒eripheral arterial disease,PAD）中，下肢動脈粥樣硬化閉塞性疾?。╨ower extremity atherosclerotic disease, LEAD）被認為是除冠狀動脈及腦血管系統外的外周大動脈閉塞而導致的疾病過程，最常見的原因就是動脈粥樣硬化（Atherosclerosis,AS）?，F如今隨著社會經濟和人民生活水平的不斷提高，伴隨著人口的不斷老齡化、工作及

2、生活壓力的增大、吸煙及大量富含脂肪及膽固醇食物的攝入等各種生活習慣的改變，致使動脈粥樣硬化的發(fā)病率呈逐年升高的趨勢。LEAD是指由于下肢動脈發(fā)生粥樣硬化導致的下肢動脈狹窄甚至是閉塞，下肢動脈供血不足或中斷而出現的下肢組織慢性或急性缺血癥狀的疾病，是周圍動脈疾病的重要組成部分。隨著病情的進展可轉變?yōu)殚]塞性動脈硬化癥，其具有發(fā)病率高、致殘率高、治愈率低等特點。高血壓、糖尿病往往也是此病的促發(fā)因素。目前國內外關于下肢動脈粥樣硬化性疾病的發(fā)病機

3、制主要有炎癥學說、脂質浸潤學說、血管中膜平滑肌細胞激活及內膜損傷理論、血小板聚集和血栓形成學說等，其中脂質浸潤及炎癥學說備受關注。目前，對于下肢動脈粥樣硬化的治療方法主要有藥物保守治療，手術治療，干細胞移植治療并同時控制血糖及血壓等原發(fā)性疾病。通過積極采取上述治療方式，通?？刹煌潭鹊母纳苹颊呦轮毖陌Y狀，但是其遠期治療效果及復發(fā)率仍較高。所以深入研究動脈粥樣硬化的發(fā)病機制，延緩動脈粥樣硬化的發(fā)生及發(fā)展，以求更有效的進行預防下肢動脈粥

4、樣硬化閉塞癥的發(fā)生以及更早期診斷及制定更為有效、科學的治療方法，減少患者痛苦，提高患者的日后生活質量，成為目前廣受關注的問題。
　　越來越多的研究表明脂肪組織與動脈粥樣硬化的發(fā)生發(fā)展有著密切關系，脂肪組織能否分泌多種脂肪因子，其中內脂素（Visfatin）是一種重要的脂肪細胞因子，其能促進基質金屬蛋白酶-9(Matrixmetalloproteinase-9,MMP-9)等合成，并提高其生物活性，對動脈粥樣硬化有重要的促進作用，與

5、心腦血管疾病及周圍血管疾病有著密切關系。脂質運載型前列腺D合成酶（1ipocalintype prostaglandin Dsynthase，L-PGDS）是脂質運載蛋白超家族的成員，目前體液中有關 L-PGDS的定量研究顯示，哺乳動物 L-PGDS的含量在腦脊液、精液含量最高，其次為尿液、血漿。其主要作用有催化前列腺素H2（PGH2）轉變成前列腺素 D2（PGD2）的作用，PGD2具有抑制炎性細胞和炎性因子黏附及抑制血小板聚集從而起到

6、抗血栓形成的作用。有相關研究也初步表明 L-PGDS具有間接拮抗COX的作用，間接起到抗動脈粥樣硬化的作用。本實驗采用逆轉錄-聚合酶連反應（Real-time PCR）和免疫組織化學法觀察人股AS斑塊中內脂素及L-PGDS的表達及二者的相關性，探討其表達水平的變化與人股AS及斑塊穩(wěn)定性之間的關系，旨在為臨床預防和治療外周動脈粥樣硬化性疾病提供新的治療靶點。
　　材料及方法：
　　1.收集鄭州大學第二附屬醫(yī)院血管外科2012年

7、4月至2014年7月股AS斑塊剝脫術中獲取的內膜標本32例，男21例，女11例，年齡34～72歲，平均（53.37±11.81）歲。15例普外科手術切除的脾動脈及腸系膜動脈標本（對照組），男11例，女4例，年齡36～75歲，平均（49.36±11.01）歲。對照組術前均排除患有癥狀性 AS、近期腦卒中（病史<3個月）；近期急性心肌梗死（病史<3個月）；感染，糖尿病、心腦血管疾病、肝、腎腫瘤等慢性疾病及傳染病，甲狀腺功能亢進及減低；近期服

8、用降糖、調脂及降壓藥物者。并確保所取標本動脈壁三層結構的完整性。每位受試患者均被告知其科研用途并簽訂知情同意書。術中獲取標本去除周圍組織后立即液氮保存?zhèn)錂z。
　　2.所取標本進行HE染色，按病理分類標準將股動脈粥樣硬化斑塊分為兩組：穩(wěn)定斑塊組（18例）、不穩(wěn)定斑塊組（14例）。15例外科手術切除的脾動脈、腸系膜動脈標本作為對照組。
　　3.利用免疫組織化學法測定股動脈粥樣硬化斑塊組與對照組中內脂素與L-PGDS蛋白的表達情況

9、，分析內脂素與L-PGDS蛋白表達的變化與股動脈粥樣硬化之間的關系，并觀察兩種蛋白之間是否有相關性。
　　4.利用逆轉錄-聚合酶連反應（Reverse Transcription-PCR）檢測股AS斑塊組織和正常動脈組織中內脂素、L-PGDS mRNA的表達，從基因層面分析兩者mRNA表達的變化與動脈粥樣硬化的意義，并分析兩者之間的關系。
　　5.統計學方法采用SPSS17.0進行分析，股動脈粥樣硬化斑塊2組及對照組內脂素和

10、L-PGDS蛋白和mRNA表達的比較應用單因素方差分析和LSD-T法檢驗，應用Spearson相關分析內脂素和L-PGDS蛋白及mRNA表達的關系，檢驗水準α=0.05。
　　結果：
　　一．免疫組織化學染色結果：
　　1.內脂素蛋白在股動脈粥樣硬化斑塊組中均有較高表達，于對照組中低表達。動脈粥樣硬化板塊中內脂素蛋白棕褐色顆粒表達陽性區(qū)主要集中在炎性細胞浸潤區(qū)域，且多集中于細胞質中。內脂素蛋白表達量不穩(wěn)定斑塊組明顯高于

11、對照組（P<0.01）；穩(wěn)定斑塊組內脂素蛋白表達量也明顯高于對照組（P<0.01）；不穩(wěn)定斑塊組則明顯高于穩(wěn)定斑塊組（P<0.01）；三組中內脂素蛋白表達量差異具有統計學意義（F=76.586，P<0.01）。
　　2.L-PGDS蛋白于動脈粥樣硬化斑塊組低表達，于對照組表達較高。L-PGDS蛋白棕褐色顆粒主要表達于動脈內膜區(qū)及斑塊炎性細胞浸潤區(qū)。L-PGDS蛋白表達量于穩(wěn)定斑塊組明顯低于對照組（P<0.01）；不穩(wěn)定斑塊組L-P

12、GDS蛋白表達量也明顯低于對照組（P<0.01）；不穩(wěn)定斑塊組則明顯低于穩(wěn)定斑塊組（P<0.01）；三組中L-PGDS蛋白表達量差異具有統計學意義（F=17.439，P<0.01）。
　　3.應用Spearson相關性分析觀察股AS斑塊中內脂素與L-PGDSD蛋白表達的相關性，穩(wěn)定斑塊組中內脂素和 L-PGDS蛋白表達呈負相關（r=-0.664，P=0.003），不穩(wěn)定斑塊組中內脂素和L-PGDS蛋白表達呈負相關（r=-0.534

13、，P=0.049）。
　　二．RT-PCR結果：
　　1.內脂素 mRNA表達量于不穩(wěn)定斑塊組明顯高于對照組（P<0.01）；穩(wěn)定斑塊組內脂素mRNA表達量也明顯高于對照組（P<0.01）；不穩(wěn)定斑塊組則明顯高于穩(wěn)定斑塊組（P<0.01）；三組中內脂素mRNA表達量差異具有統計學意義（F=22.977，P<0.01）。
　　2.L-PGDS mRNA表達量于不穩(wěn)定斑塊組明顯低于穩(wěn)定斑塊組及對照組（P<0.01）；穩(wěn)定斑

14、塊組L-PGDS蛋白表達量也明顯低于對照組（P<0.01）；三組中L-PGDS蛋白表達量差異具有統計學意義（F=25.388，P<0.01）。
　　3.應用Spearson相關性分析顯示，穩(wěn)定動脈硬化斑塊組中內脂素和L-PGDS mRNA表達呈負相關（r=-0.505，P=0.021），在不穩(wěn)定動脈硬化組中內脂素和L-PGDS mRNA表達呈負相關（r=-0.609，P=0.021）。
　　結論：
　　1.內脂素和L-