SEPT4、TEKT4基因與特發(fā)性弱精子癥關系的研究.pdf

1、背景與目的：
　　 近幾十年,全世界范圍內育齡男性的精液質量都存在著下降趨勢,男性不育已是全世界面臨的重要問題,而男性精液質量的下降主要體現在指標精子活動力低下。精子活力是指精子的前向運動能力,它是精子穿透宮頸粘液,到達受精部位,穿透放射冠和透明帶,進入卵細胞的胞漿,完成受精全過程的重要條件。世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)根據精子的前向運動能力,將精子分為a、b、c、d四級,其中a級≥

2、25％或(a+b)級＞50%為精子活力正常,而低于此標準即為弱精子癥(Asthenozoospermia,AZS)。AZS是造成男性低生育力和不育的主要原因之一。據報道[1],大約24%的低生育力男性是由于AZS引起的,另外55%的低生育力男性患者合并精液異常、精子活力低下、精子形態(tài)異常。引起弱精子癥的機制也很復雜,主要涉及精子能量代謝的異常、信號傳導通路的異常以及精子運動結構的異常等。
　　 由于精子的運動主要是靠精子鞭毛的擺

3、動實現的,因此分析精子鞭毛的結構特征并探討弱精子癥的病因及其發(fā)生機制,為低生育男性提供有效合理的臨床治療策略尤為重要。精子鞭毛是精子的主要組成部分之一,主要由軸絲、外周致密纖維(outer dense fibers,ODFs)和線粒體鞘(mitochondrial sheath,MS)等組成。目前研究發(fā)現,大約有250多種精子鞭毛軸絲及其附屬結構的基因參與精子運動這一生理過程,它們的突變或表達異常均可引起精子鞭毛結構和功能的紊亂,導致精

4、子運動障礙和活力低下[2-3]。
　　 為更深入地了解AZS的發(fā)生機制,本研究采用逆轉錄.多聚酶鏈式反應(RT-PCR)、免疫細胞化學以及Western印跡技術,探討精子鞭毛基因SEPT4、TEKT4與特發(fā)性弱精子癥發(fā)生機制的關系,從而為臨床對特發(fā)性弱精子癥的可行性診斷和治療提供可靠的實驗基礎和理論依據。
　　 材料與方法：
　　 1研究對象
　　 30份正常生育男性(年齡21-37歲)精液標本來自于20

5、10年9月-2011年2月河南省人類精子庫合格的供精志愿者,精子密度≥60×106/ml,精子活力(a+b)級≥60%;32份特發(fā)性弱精子癥患者(年齡20-38歲)精液標本來自于同期鄭州大學第三附屬醫(yī)院生殖醫(yī)學中心男科門診的患者,精子密度≥20×106/ml,精子活力(a+b)級＜50%,分別組成為正常男性組和弱精子癥組。
　　 2方法2.1 RT-PCR
　　 采用RT-PCR方法,檢測SEPT4 mRNA和TEKT4

6、 mRNA在兩組精子中的表達。
　　 2.2 Western印跡
　　 采用Western印跡方法,檢測SEPT4蛋白和TEKT4蛋白在兩組精子中的表達。
　　 2.3免疫細胞化學
　　 采用免疫細胞化學技術,檢測SEPT4蛋自在兩組精子中的定位及表達。
　　 3統(tǒng)計處理
　　 采用SPSS17.0軟件進行統(tǒng)計學分析,數據以-x±s表示。弱精子癥組和正常男性組SEPT4、TEKT4表達之間

7、的比較采用兩獨立樣本t-檢驗進行分析;檢驗水準α=0.05。
　　 結果：
　　 1兩組研究對象精子中SEPT4蛋白的定位與表達
　　 SEPT4蛋白在精子中定位于精子鞭毛的環(huán)結構,并且與正常男性組相比,特發(fā)性弱精子癥患者精子中SEPT4蛋白表達量的差異具有顯著意義(t=3.452,P=0.001)。
　　 2兩組研究對象精子中SEPT4 mRNA的表達
　　 弱精子癥組精子中SEPT4 mRNA

8、表達量與正常男性組相比顯著降低,差異具有顯著意義(t=3.521,P=0.001)。
　　 3兩組研究對象精子中SEPT4蛋白的表達
　　 弱精子癥組精子中SEPT4蛋白的表達水平與正常男性組相比顯著降低,差異具有顯著意義(t=5.872,P=0.001)。
　　 4兩組研究對象精子中TEKT4 mRNA的表達
　　 TEKT4 mRNA在弱精子癥組精子中的表達量與正常男性組相比顯著降低(t=4.325,