電針對(duì)SD大鼠局灶腦缺血-再灌注后腦內(nèi)PLGF及受體與血管再生影響的研究.pdf

1、背景:隨著社會(huì)的進(jìn)步、中國(guó)老齡化的出現(xiàn),缺血性腦血管病的發(fā)病率日益升高,其死亡率高、致殘率高,嚴(yán)重危害人類健康和生命。因此研究缺血性腦血管病的損傷及修復(fù)機(jī)制非常重要。既往研究表明腦缺血后盡快恢復(fù)缺血區(qū)的血供,挽救瀕死的神經(jīng)元、神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞和血管內(nèi)皮細(xì)胞是治療缺血性腦血管病的關(guān)鍵,以血管修復(fù)及再生作為切入點(diǎn),促進(jìn)腦缺血區(qū)血管生成為臨床治療的一個(gè)重要方面。腦缺血后血管再生的研究熱點(diǎn)是VEGF-A,作為同一家族成員的PLGF卻在缺血性腦血病中

2、研究較少。PLGF。最初被認(rèn)為與胎盤(pán)絨毛的血管新生和維持胎盤(pán)的生長(zhǎng)及發(fā)育有關(guān)。現(xiàn)在已發(fā)現(xiàn)PLGF在心肌缺血、腫瘤、炎癥及創(chuàng)傷愈合等病理?xiàng)l件下與血管再生密切相關(guān)。故本實(shí)驗(yàn)在SD大鼠局灶腦缺血/再灌注模型及電針干預(yù)下觀察缺血區(qū)大腦皮質(zhì)PLGF及其受體Flt-1 mRNA和蛋白表達(dá)的變化規(guī)律,研究PLGF/Flt-1在局灶腦缺血/再灌注后的作用并進(jìn)一步探討電針促進(jìn)局灶腦缺血/再灌注腦內(nèi)血管再生的機(jī)制。
　　 目的:
　　 1、

3、探討SD大鼠局灶腦缺血/再灌注后及電針干預(yù)下缺血側(cè)PLGF及Flt-1時(shí)空表達(dá)規(guī)律;
　　 2、探討PLGF及Flt-1在SD大鼠局灶腦缺血/再灌注后血管再生的作用;
　　 3、探討電針促進(jìn)SD大鼠局灶腦缺血/再灌注后缺血側(cè)血管再生機(jī)制的研究。
　　 方法:雄性SD大鼠,隨機(jī)分為正常組(NC組)、模型組(I/R組)、電針組(I/RE組),通過(guò)改良線栓法制備大腦中動(dòng)脈局灶腦缺血2h/再灌注模型,將模型組和電針組分為

4、局灶腦缺血2h再灌注1d、3d和7d三個(gè)亞組,取雙側(cè)“合谷”穴(LI4)為電針刺激穴位。通過(guò)HE染色來(lái)了解局灶腦缺血/再灌注后腦組織的病理學(xué)變化;通過(guò)TTC染色觀察局灶腦缺血/再灌注后腦梗死體積的變化;神經(jīng)癥狀學(xué)評(píng)分了解局灶腦缺血/再灌注后各個(gè)時(shí)間點(diǎn)大鼠神經(jīng)功能缺損情況。采用免疫組化法檢測(cè)胎盤(pán)生長(zhǎng)因子(PLGF)和受體(Flt-1)蛋白在缺血區(qū)大腦皮質(zhì)分布及其表達(dá);RT-PCR法檢測(cè)缺血區(qū)大腦皮質(zhì)PLGF mRNA和Flt-1 mRNA

5、的表達(dá);Western blot法定量檢測(cè)缺血區(qū)側(cè)大腦皮質(zhì)PLGF蛋白表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1、SD大鼠造模及電針刺激后,在各個(gè)時(shí)間點(diǎn)大鼠均出現(xiàn)神經(jīng)功能缺損。在局部腦缺血/再灌注后1d、3d、7d,FR組與FRE組大鼠神經(jīng)癥狀學(xué)評(píng)分逐漸減小;與I/R組比較,I/RE組1d、3d神經(jīng)癥狀學(xué)評(píng)分減小,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),I/RE組7d有顯著性差異(P＜0.05);
　　 2、TTC染色結(jié)果示I/R組

6、與I/RE組都有白色的梗死灶;與I/R組比較,I/RE組缺血側(cè)腦梗死體積減小,差別有顯著性(P＜0.05);
　　 3、免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示PLGF陽(yáng)性細(xì)胞胞漿黃染,在大腦皮質(zhì)、海馬等部位表達(dá),主要見(jiàn)于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)元。NC組有少量的PLGF陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)。與NC組比較,I/R組各時(shí)間點(diǎn)PLGF陽(yáng)性細(xì)胞增多,1d表達(dá)已明顯增多(P＜0.01),3d表達(dá)有一峰值(P＜0.01),7d仍高于正常組(P＜0.05);I

7、/RE組各時(shí)間點(diǎn)PLGF陽(yáng)性細(xì)胞明顯增多(P＜0.01)。與I/R組比較,I/RE組1d、3d、7d PLGF陽(yáng)性細(xì)胞增多更明顯(P＜0.01),峰值仍在3d。
　　 4、免疫組化檢測(cè)結(jié)果顯示Flt-1陽(yáng)性細(xì)胞胞漿黃染,大腦皮質(zhì)、海馬、腦室旁周?chē)M織的血管內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)元都有表達(dá)。NC組大腦組織Fit-1陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)極少;與NC組比較,I/R組1d表達(dá)已經(jīng)升高(P＜0.01),3d表達(dá)達(dá)高峰(P＜0.01),7d表達(dá)開(kāi)始回落,但

8、仍有較高表達(dá)(P＜0.01);I/RE組Flt-1細(xì)胞表達(dá)增多(P＜0.01),其表達(dá)部位及規(guī)律同I/R組,高峰仍在3d。與I/R組相比,I/RE組ld Flt-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增多,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),FRE組3d、7d Flt-1陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)增多更明顯,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);
　　 5、RT-PCR.法檢測(cè)大腦缺血區(qū)皮質(zhì)PLGF mRNA的表達(dá)。結(jié)果顯示,NC組PLGF mRNA有微量表達(dá),I/R組和I/RE

9、組各時(shí)間點(diǎn)PLGFmRNA表達(dá)高于NC組(P＜0.01),且PLGF mRNA成一單峰表達(dá),峰值在3d。與FR組比較,I/RE組1d PLGF mRNA表達(dá)增加(P＜0.05),I/RE組3d、7d表達(dá)增加更明顯(P＜0.01);
　　 6、RT-PCR法檢測(cè)大腦缺血區(qū)皮質(zhì)Flt-1 mRNA的表達(dá)。結(jié)果顯示,NC組有微量Fit-1 mRNA表達(dá);與NC組比較,I/R組Fit-1 mRNA于1d、3d表達(dá)逐漸升高(P＜0.01)

10、,7d開(kāi)始回落,但仍高于正常組,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01);I/RE組時(shí)間點(diǎn)表達(dá)增高更明顯(P＜0.01)。與FR組相比,I/RE組各時(shí)間點(diǎn)Flt-1 mRNA表達(dá)升高,差別具有顯著性(P＜0.01);
　　 7、Western blot定量檢測(cè)PLGF蛋白結(jié)果顯示,在正常大腦組織內(nèi)PLGF有少量表達(dá);與NC組相比,I/R組各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)增高,于再灌注1d開(kāi)始升高(P＜0.01),3d時(shí)達(dá)到高峰(P＜0.01),7d仍高于正常

11、組,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);I/RE組各時(shí)間點(diǎn)表達(dá)明顯增高,差別有顯著意義(P＜0.01)。與FR組相比,I/RE組1d增高,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),I/RE組3d、7d差別具有顯著性(P＜0.01),于3d時(shí)表達(dá)達(dá)高峰。
　　 結(jié)論:
　　 1、電針“合谷”穴可通過(guò)促進(jìn)SD大鼠局灶腦缺血/再灌注后缺血區(qū)的血管再生而改善大鼠神經(jīng)功能評(píng)分和腦梗死體積;
　　 2、電針“合谷”穴可通過(guò)上調(diào)SD大鼠局灶