NFAT調(diào)控基因在他克莫司藥效學(xué)監(jiān)測中的意義.pdf

1、目的:建立測定人血漿中NFATc1、IL-2、IFN-γ、GM-CSF mRNA表達(dá)情況的反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈反應(yīng)法（Real-time qPCR）;通過實(shí)驗分析腎移植術(shù)后患者發(fā)生急性排斥與感染時體內(nèi)NFATc1、IL-2、IFN-γ、GM-CSF mRNA的表達(dá)情況與經(jīng)過治療使患者的急性排斥或感染得到逆轉(zhuǎn)且恢復(fù)正常體征時，其體內(nèi)NFATc1、IL-2、IFN-γ、GM-CSF mRNA的表達(dá)情況，并與他克莫司(TAC)血藥濃度聯(lián)合考察，

2、建立他克莫司藥效學(xué)監(jiān)測方法。
　　方法:
　　1.他克莫司藥效學(xué)監(jiān)測方法的建立：采用Real-time qPCR法，收集腎移植術(shù)后患者的血漿，進(jìn)行NFATc1、IL-2、IFN-γ、GM-CSF mRNA的檢測。
　　2. NFAT調(diào)控基因在發(fā)生急性排斥的腎移植患者中的檢測：將經(jīng)病理證實(shí)的T細(xì)胞介導(dǎo)的急性排斥的20例腎移植患者納入研究中。患者納入研究組后的第1天，早晨服藥前空腹采血3 mL，供檢測患者NFATc1、IL

3、-2、IFN-γ、GM-CSF mRNA使用。當(dāng)入組病人的急性排斥發(fā)生逆轉(zhuǎn)，臨床觀察指標(biāo)均恢復(fù)正常值后，于臨床診斷患者的急性排斥消失后的第1天，患者早晨服藥前空腹采血3 mL進(jìn)行同樣的檢測。
　　3. NFAT調(diào)控基因在發(fā)生感染的腎移植患者中的檢測：將檢驗科檢測為細(xì)菌感染的20例腎移植患者納入研究中。患者納入研究組后的第1天，早晨服藥前空腹采血3 mL，供檢測患者NFATc1、IL-2、IFN-γ、GM-CSF mRNA使用。當(dāng)入

4、組病人的細(xì)菌感染消失后，于檢驗科檢測患者的細(xì)菌感染消失后的第1天，患者早晨服藥前空腹采血3 mL進(jìn)行同樣的檢測。
　　4.腎移植患者中他克莫司血藥濃度與藥效學(xué)相關(guān)性研究：20例腎移植術(shù)后發(fā)生急性排斥與20例腎移植術(shù)后發(fā)生細(xì)菌感染的腎移植患者，檢測其發(fā)生急性排斥和細(xì)菌感染及兩種反應(yīng)現(xiàn)象消失時患者體內(nèi)NFATc1、IL-2、IFN-γ、GM-CSF mRNA的表達(dá)情況的變化，以及其與他克莫司血藥濃度之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:

5、>　　1. NFAT調(diào)控基因的表達(dá)情況的測定可以用于TAC藥效學(xué)監(jiān)測，該方法具有快速、簡單、靈敏度高等特點(diǎn)，可以滿足TAC藥效學(xué)監(jiān)測需求。
　　2.排斥組入選的20例腎移植患者，經(jīng)血漿NFAT調(diào)控基因mRNA檢測，其具體表達(dá)情況從數(shù)據(jù)中可以看出，排斥組腎移植患者在接受治療，排斥反應(yīng)消天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文
　　失后，其血漿中NFATc1、IL-2、IFN-γ、GM-CSF mRNA的表達(dá)值均較治療前有顯著性的降低，差異具有

6、統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。數(shù)據(jù)結(jié)果表明，NFATc1 mRNA檢測的顯著性差異最大。
　　3．感染組腎移植患者在接受治療細(xì)菌感染消失后，其血漿中NFATc1、IL-2、IFN-γ、GM-CSF mRNA的表達(dá)值均較治療前有顯著性的增高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。數(shù)據(jù)結(jié)果表明，GM-CSF mRNA的顯著性差異最大。
　　4．根據(jù)血藥濃度測定結(jié)果統(tǒng)計，排斥組患者治療前后的C0分別為4.44±1.89和6.81±2.

7、63，P=0.002,具有統(tǒng)計學(xué)差異，排斥組患者TAC與NFAT調(diào)控基因之間并無顯著的相關(guān)性（P＞0.05）。感染組患者治療前后的C0分別為8.60±3.79和4.62±1.86，P<0.001，具有統(tǒng)計學(xué)差異，感染組患者TAC與NFAT調(diào)控基因之間并無顯著的相關(guān)性（P＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　1.本研究中建立的Real-time qPCR法簡單、快速、靈敏。對20例腎移植術(shù)后發(fā)生急性排斥的患者的檢測結(jié)果表明，腎移植術(shù)

8、后患者其血漿中NFAT調(diào)控基因表達(dá)值的異常升高與患者發(fā)生急性排斥密切相關(guān)，本研究初步為NFAT調(diào)控基因作為一種新型的鈣調(diào)磷酸酶抑制劑藥效學(xué)指標(biāo)提供了參考依據(jù)。
　　2．腎移植術(shù)后患者其血漿中NFAT調(diào)控基因表達(dá)值的異常降低與患者發(fā)生細(xì)菌感染密切相關(guān)，患者血漿中NFAT調(diào)控基因表達(dá)值的檢測有助于對患者機(jī)體免疫狀態(tài)進(jìn)行監(jiān)測。
　　3．監(jiān)測腎移植術(shù)后患者其體內(nèi)NFAT調(diào)控基因表達(dá)情況能預(yù)示腎移植術(shù)后急性排斥或細(xì)菌感染，對治療效果的