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1、目的:
8-Prenylnaringenin(8-PN)是迄今發(fā)現(xiàn)的活性最強(qiáng)的植物雌激素,其改善實(shí)驗(yàn)性絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松的作用已有報(bào)道,但其具體機(jī)制是否通過(guò)影響骨形成或骨吸收未完全闡明。本研究擬觀察:
1、8-PN對(duì)小鼠單核巨噬細(xì)胞(RAW264.7)誘導(dǎo)成破骨細(xì)胞的分化及骨吸收功能的影響,并與金雀異黃素、大豆苷元等其他植物雌激素進(jìn)行比較;
2、8-PN對(duì)小鼠成骨細(xì)胞株(MC3T3-E1)分泌的破骨
2、細(xì)胞分化因子NF-κB受體的配體(RANKL)、骨保護(hù)素(OPG)、巨噬細(xì)胞集落刺激因子(M-CSF)的影響,并與金雀異黃素、大豆苷元等其他植物雌激素進(jìn)行比較。
方法:
1、將不同濃度的8-PN(10-8,10-7,10-6M)、金雀異黃素(10-6M)、大豆苷元(10-6 M)作用于RAW264.7,加入M-CSF和RANKL誘導(dǎo)為破骨細(xì)胞,在第3d,6d,9d,12d分別計(jì)數(shù)破骨細(xì)胞數(shù)量;
3、2、將上述相應(yīng)濃度的藥物在RAW264.7誘導(dǎo)分化第9d分別加入,第15d檢測(cè)培養(yǎng)體系中牛股骨片骨吸收陷窩面積,以反映骨吸收功能;
3、將上述相應(yīng)濃度的藥物在MC3T3-E1培養(yǎng)第9d加入,于第12d提取標(biāo)本,RT-PCR檢測(cè)細(xì)胞中RANKL、OPG、M-CSF的mRAN表達(dá)變化,ELISA檢測(cè)上清液中RANKL、OPG的蛋白濃度。
結(jié)果:
1、8-PN可減少破骨細(xì)胞數(shù)量,劑量依賴性減少骨吸收陷
4、窩面積,其抑制破骨細(xì)胞分化和骨吸收作用弱于雌二醇,但在骨吸收作用上強(qiáng)于另外兩種植物雌激素。
2、8-PN可劑量依賴性抑制成骨細(xì)胞表達(dá)和分泌RANKL,對(duì)OPG的表達(dá)和分泌有一定促進(jìn)作用,降低RANKL/OPG比值,對(duì)M-CSF的表達(dá)則無(wú)顯著影響。其對(duì)RANKL/OPG的調(diào)節(jié)效應(yīng)弱于雌二醇,但強(qiáng)于另外兩種植物雌激素。
結(jié)論:
8-PN能直接抑制破骨細(xì)胞分化和骨吸收,也可通過(guò)調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞表達(dá)和分泌R
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