肥胖大鼠右心耳內(nèi)分泌結(jié)構(gòu)和ANP表達(dá)的形態(tài)學(xué)觀察.pdf

1、目的：肥胖為目前世界上普遍存在的一種流行疾病，也是心血管疾病、高血壓疾病、糖尿病等多種疾病的主要危險(xiǎn)因素。肥胖病人容易發(fā)生高血壓；然而，心臟作為心血管系統(tǒng)中的重要器官，與高血壓的發(fā)生和發(fā)展有重要關(guān)系。心臟不僅是動(dòng)力器官，也是一個(gè)內(nèi)分泌器官，具有分泌心房鈉尿肽(atrial natriuretic polypeptide，ANP)的功能；而且在右心房分泌數(shù)量多，又以右心耳為最。ANP具有排鈉、利尿以及舒張血管的作用，對(duì)于調(diào)節(jié)血壓具有重大影

2、響；其濃度與高血壓病的進(jìn)程息息相關(guān)。但是，ANP與肥胖的關(guān)系目前尚不十分清楚，仍缺乏形態(tài)學(xué)方面的證據(jù)。本研究通過對(duì)肥胖大鼠右心耳組織標(biāo)本，進(jìn)行光鏡和電鏡觀察，以及用免疫組織化學(xué)技術(shù)，對(duì)比觀察肥胖和正常大鼠右心耳心肌對(duì)ANP抗體的反應(yīng)，揭示肥胖大鼠右心耳的細(xì)微和超微結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，探討肥胖與正常大鼠ANP反應(yīng)強(qiáng)度的差異，為右心耳心肌細(xì)胞分泌ANP的形式和特點(diǎn)，提供形態(tài)學(xué)方面的依據(jù)。
　　方法：
　　1動(dòng)物模型的制備與分組：
　

3、　選取健康成年雄性SD大鼠10只，隨機(jī)分為對(duì)照組5只和高脂飲食組5只。對(duì)照組給予基礎(chǔ)飼料，高脂飲食組給予高脂飼料，分別喂養(yǎng)10周。催肥造模成功后麻醉，處死動(dòng)物取右心耳。
　　2光鏡樣品制備與觀察：
　　高脂飲食組與對(duì)照組大鼠的右心耳標(biāo)本，均進(jìn)行石蠟包埋組織切片，行蘇木精-伊紅(haematoxylin-eosin，HE)染色后用光鏡(light microscope，LM)觀看。觀察右心耳的結(jié)構(gòu)，三層膜的排列，血管、淋巴管的

4、分布情況，以及高脂組與對(duì)照組的染色區(qū)別。
　　3免疫組織化學(xué)染色與觀察：
　　高脂飲食組與對(duì)照組大鼠的右心耳標(biāo)本，進(jìn)行常規(guī)石蠟包埋組織切片，按免疫組織化學(xué)ABC法，進(jìn)行ANP免疫組化染色，另取一部分組織用PBS液代替抗體進(jìn)行對(duì)照，最后用DAB顯色。在Olympus顯微鏡下觀察，顯示右心耳組織中ANP的分布情況，以及高脂飲食組與對(duì)照組ANP分布和反應(yīng)強(qiáng)度的差異。
　　4透射電鏡樣品制備與觀察：
　　高脂組與對(duì)照組的

5、右心耳均進(jìn)行通常的電鏡樣品制備，右心耳行超薄組織切片后，用透射電鏡(transmission electron microscope，TEM)觀看。顯示右心耳組織的超微結(jié)構(gòu)以及心分泌顆粒的分布特點(diǎn)；觀察心房肌細(xì)胞之間毛細(xì)血管及毛細(xì)淋巴管的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。
　　5掃描電鏡樣品制備與觀察：
　　將大鼠的右心耳組織進(jìn)行掃描電鏡樣品制備，使用掃描電鏡(scanningelectron microscope，SEM)觀看心內(nèi)膜腔面和心外膜表

6、面的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。
　　結(jié)果：
　　1石蠟切片HE染色光鏡觀察：
　　大鼠右心耳由三層結(jié)構(gòu)組成，分別為心外膜、心內(nèi)膜和心肌膜。在薄層的結(jié)締組織外面再被覆一層上皮細(xì)胞，組成了心外膜，并且在不同的部位，心外膜下結(jié)締組織的厚薄程度有差異。在此可見到許多血管和淋巴管。心外膜之下是心肌膜，此層可見縱行和環(huán)形排列的心肌纖維，兩組心肌纖維交織成網(wǎng)狀，并有大量的毛細(xì)血管存在于網(wǎng)孔之中。最內(nèi)層是心內(nèi)膜，由心內(nèi)膜下層的結(jié)締組織及扁平內(nèi)皮細(xì)胞所

7、組成。
　　在對(duì)照組動(dòng)物，顯示心肌細(xì)胞的胞核形態(tài)、大小正常，邊緣規(guī)則，形態(tài)清晰可見，心肌纖維排列規(guī)則，間質(zhì)結(jié)構(gòu)正常；然而，高脂飲食組的右心耳，顯示心肌細(xì)胞的胞核發(fā)生形態(tài)改變，變粗，邊緣不規(guī)則，心肌纖維排列紊亂，間質(zhì)增寬似增生。
　　2免疫組織化學(xué)染色光鏡觀察：
　　心肌組織可見棕色的ANP陽(yáng)性顆粒，分布于心肌細(xì)胞內(nèi)，多分布于核周圍，尤其是在核的兩端，在肌原纖維之間，也有少量反應(yīng)產(chǎn)物存在。而陰性對(duì)照組則未見ANP陽(yáng)性顆粒

8、
　　在高脂飲食組的右心耳組織內(nèi)，和對(duì)照組相比，ANP免疫反應(yīng)明顯增強(qiáng)，棕色著色顆粒明顯增多。
　　3透射電鏡觀察：
　　扁平細(xì)胞組成了心外膜的上皮和心內(nèi)膜的內(nèi)皮，可以看到上皮細(xì)胞及內(nèi)皮細(xì)胞。其中上皮細(xì)胞的連接比較松散，其間存在一些指狀的突起，就是微絨毛，它們朝著心包腔面和基底面突起；然而，內(nèi)皮細(xì)胞的連接相對(duì)比較緊密，其微絨毛稀疏而短小。上皮下和內(nèi)皮下都是疏松結(jié)締組織，膠原纖維是結(jié)締組織的主要成分，在此可見血管、淋巴管

9、、神經(jīng)等。
　　在右心耳心房肌細(xì)胞的縱向切面上，可看到線粒體和肌小節(jié)，在肌細(xì)胞核附近，能看到高爾基體和許多分泌顆粒；分泌顆粒大多呈圓形或橢圓形，電子密度較高，周圍有界膜包裹。另外，分泌顆粒也存在于組織間隙附近的細(xì)胞膜處。這些分泌顆粒外包裹細(xì)胞膜和少量胞漿，形成乳頭狀突起。在心肌細(xì)胞的間隙中，還能看到被排出的分泌顆粒。在心房肌細(xì)胞之間，能看到毛細(xì)淋巴管和毛細(xì)血管。毛細(xì)淋巴管管壁較薄，管腔較大，形態(tài)不規(guī)則，管腔內(nèi)?？捎^察到顆粒樣物質(zhì)和

10、碎屑。而毛細(xì)血管內(nèi)皮比較厚，腔內(nèi)可見紅細(xì)胞。
　　在高脂飲食組動(dòng)物，右心耳出現(xiàn)脂質(zhì)沉積或脂肪變性，心房肌細(xì)胞肥大，細(xì)胞核邊緣變得不規(guī)則，心房肌細(xì)胞之間的空隙變大，細(xì)胞內(nèi)分泌顆粒普遍增多。
　　4掃描電鏡觀察：
　　大鼠右心耳的心外膜上皮為扁平細(xì)胞，形態(tài)不規(guī)則，邊緣為波浪形，中央部稍微隆起；上皮細(xì)胞的表面有很多微絨毛，邊緣的微絨毛長(zhǎng)而密集。在相鄰上皮細(xì)胞的交界處，?？梢姷娇紫稑咏Y(jié)構(gòu)。
　　右心耳的心內(nèi)膜比較平整、光

11、滑，所覆蓋的內(nèi)皮為條索狀或皺褶狀排列，而且在胞核存在的地方隆起。內(nèi)皮細(xì)胞上的微絨毛稀疏，而且短小。在心內(nèi)膜表面，還能看到呈現(xiàn)嵴狀隆起的肌束向心房腔內(nèi)突出，形成所謂的梳狀肌。
　　結(jié)論：
　　1采用高脂飲食喂養(yǎng)大鼠，可致其肥胖，使體重增加，成功建立營(yíng)養(yǎng)性肥胖動(dòng)物模型。
　　2肥胖大鼠出現(xiàn)心肌組織的結(jié)構(gòu)改變，引起間質(zhì)內(nèi)脂肪沉積，心肌纖維脂肪變性，甚至導(dǎo)致心肌細(xì)胞肥大。
　　3肥胖大鼠右心耳內(nèi)心鈉肽免疫反應(yīng)明顯增強(qiáng)，反