血管內(nèi)皮細(xì)胞特異表達(dá)Cre重組酶轉(zhuǎn)基因小鼠的建立.pdf

1、血管內(nèi)皮細(xì)胞參與血管形成、血管穩(wěn)態(tài)維持、血栓形成、炎癥和血管重建等生理和病理過程。血管內(nèi)皮細(xì)胞在血管功能控制方面扮演了重要角色，對血管自身穩(wěn)定起主要調(diào)控作用。 為了便于通過Cre/LoxP系統(tǒng)研究相關(guān)基因在血管內(nèi)皮細(xì)胞中的功能，本文創(chuàng)建了Tie2-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠，利用血管內(nèi)皮細(xì)胞特異性表達(dá)的Tie2基因的啟動(dòng)子和增強(qiáng)子驅(qū)動(dòng)Cre重組酶基因在血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)。通過顯微注射的方法將15.9kb的轉(zhuǎn)基因片段Tie2-Cre引入小鼠

2、受精卵，獲得子代小鼠57只，經(jīng)基因型鑒定有6只小鼠在基因組上整合有Tie2-Cre基因，整合率為11％。通過多組織的RT-PCR證實(shí)在所有組織都能檢測到Cre重組酶的轉(zhuǎn)錄。為了驗(yàn)證Cre重組酶在轉(zhuǎn)基因小鼠中表達(dá)的細(xì)胞分布及其在體內(nèi)介導(dǎo)重組的功能，將Tie2-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠分別與Smad4條件基因打靶小鼠和ROSA26轉(zhuǎn)基因小鼠交配。Tie2-Cre；Smad4Co/+小鼠的多組織基因組DNA的PCR結(jié)果顯示Cre重組酶在所有包含血管內(nèi)