CD169+腹腔巨噬細胞在DSS誘導的結腸炎中的作用.pdf

1、炎癥性腸疾病(Inflammatory bowel disease，IBD)包括克羅恩病(Crohn'sdisease，CD)和潰瘍性結腸炎(Ulcerative colitis，UC)。IBD的發(fā)病率逐年升高，而且，IBD患者形成結直腸癌(CRC)的風險會增加，因此受到了人們的廣泛關注。目前，IBD的發(fā)病機制仍不清楚，但是遺傳、免疫和環(huán)境風險等因素的相互作用與IBD的發(fā)病機制具有一定關聯(lián)。
　　巨噬細胞作為一種重要的免疫細胞在炎

2、癥疾病中具有非常重要的作用。巨噬細胞是高度異質(zhì)性的細胞，許多組織及腔室都分布著多種具有不同表型及功能的巨噬細胞。CD169(Siglec-1，唾液酸粘附素)是表達在特定巨噬細胞表面的唾液酸粘附受體。在淋巴結中，CD169+巨噬細胞能夠通過吞噬死亡腫瘤細胞并隨后將腫瘤相關抗原提呈至CD8+T細胞而介導抗腫瘤免疫。在脾臟中，CD169+巨噬細胞位于脾臟白髓的邊緣區(qū)，可以通過吞噬凋亡細胞并誘導免疫耐受調(diào)控機體的免疫平衡。在腸道及腹腔都分布著一

3、類表達CD169的巨噬細胞。有研究報道，腸固有層定居的CD169+巨噬細胞與黏膜損傷及炎性單核細胞招募有關。腹腔巨噬細胞在控制炎癥和防御腹腔感染等方面也具有非常重要的作用。由于腹腔巨噬細胞與腸道定居巨噬細胞的起源不同，因此，研究腹腔中表達CD169的巨噬細胞在腸黏膜炎癥中的作用有助于理解IBD的發(fā)病機制，為IBD炎癥的控制和緩解提供新的思路。
　　目的:
　　通過使用葡聚糖硫酸鈉(DSS)建立的小鼠結腸炎模型和CD169-D

4、TR（diphtheria toxin receptor，白喉毒素受體）轉(zhuǎn)基因小鼠來研究小鼠腹腔CD169+巨噬細胞在結腸炎癥發(fā)展中的作用，并進一步研究CD169+巨噬細胞在DSS誘導結腸炎中的具體作用機制。
　　方法:
　　首先用流式和免疫熒光染色的方法確定了CD11b+CD169+腹腔巨噬細胞在DSS誘導結腸炎癥中的數(shù)量變化，提示了CD169+腹腔巨噬細胞在結腸炎中發(fā)揮重要作用。然后，使用CD169-DTR轉(zhuǎn)基因小鼠進一

5、步研究CD169+巨噬細胞在DSS誘導結腸炎中的作用。將白喉毒素(DT)注射到CD169-DTR小鼠體內(nèi)后，CD169+巨噬細胞選擇性缺失。利用DSS誘導的結腸炎模型，分別比較C57BL/6野生型小鼠和CD169-DTR小鼠的臨床發(fā)病情況。通過比較兩種小鼠的體重變化、結腸長度及結腸組織結構形態(tài)的變化判斷CD169+腹腔巨噬細胞缺失后小鼠的發(fā)病情況，明確該細胞亞群的存在與否對于結腸炎發(fā)病的重要性。此外還通過Q-PCR和ELISA等分子生物

6、學方法檢測了CD169+巨噬細胞缺失后，相關炎性因子和趨化因子的表達變化，進一步明確了CD169+腹腔巨噬細胞在結腸炎中具體的作用機制。
　　結果:
　　在DSS誘導的結腸炎中，CD11b+CD169+腹腔巨噬細胞的數(shù)量明顯增加，提示CD169+腹腔巨噬細胞在結腸炎的炎癥過程中有重要作用。CD169-DTR小鼠對比實驗表明CD169+巨噬細胞缺失后的小鼠不能被DSS誘導典型的結腸炎。與野生型小鼠相比，CD169-DTR小鼠的

7、體重減輕和直腸出血等結腸炎癥狀并不明顯。而且，組織學結果顯示結腸組織的炎性細胞浸潤及損傷情況程度也明顯不如野生型小鼠。Q-PCR結果顯示IL-1β、IL-6、IL-12、IL-23和TNFα等炎性因子的表達水平明顯低于野生型小鼠。此外，趨化因子的分析結果顯示DSS誘導的野生型小鼠腸炎模型中，腹腔巨噬細胞表達CCL3、CCL8的表達水平降低，而CCL22的表達明顯升高。對野生型小鼠連續(xù)6天注射重組CCL22蛋白后，DSS誘導結腸炎的癥狀得

8、到明顯緩解。
　　結論:
　　本實驗揭示了腹腔CD169+巨噬細胞在DSS誘導結腸炎中起著重要作用。腹腔CD169+巨噬細胞的數(shù)量在CD169-DTR小鼠注射DT后，CD169+巨噬細胞選擇性缺失，使DSS誘導結腸炎過程中CCL22的表達升高。向DSS誘導的小鼠體內(nèi)注射CCL22重組蛋白治療結腸炎，能使結腸炎的臨床癥狀得到緩解。CD169+巨噬細胞可能是通過調(diào)控CCL22的分泌而在DSS誘導結腸炎中發(fā)揮作用，表明CCL22有