髓系衍生抑制性細胞在潰瘍性結腸炎癌變中的作用.pdf

1、背景:潰瘍性結腸炎是一種原因未明的結腸和直腸的炎性病變，其癌變風險可隨著病程的延長而增加。目前由于潰瘍性結腸炎癌變的臨床病例的累積需要較長的時間，難度較大，因此，建立一種切實可行的可以模仿人類潰瘍性結腸炎癌變過程的動物模型則顯得非常重要。近年來，關于潰瘍性結腸炎癌變的動物模型較多。研究者發(fā)現(xiàn)，給予小鼠葡聚糖硫酸鈉和普通飲用水數(shù)個循環(huán)，可觀察到“炎癥-不典型增生-癌變”的發(fā)生，但所需實驗周期較長且癌變率低。文獻報道，予以小劑量氧化偶氮甲烷

2、(AOM)及1個周期2％葡聚糖硫酸鈉（DSS，分子量36，000-50，000）致炎刺激，可于短期內（20周）建立潰瘍性結腸炎癌變的動物模型[3]。髓系衍生抑制性細胞(Myeloid-derived suppressorcells，MDSCs)是具有多項分化潛能和免疫抑制功能的一類未成熟的髓系細胞群體，主要由巨噬細胞、中性粒細胞、樹突狀細胞的祖細胞以及幼稚的髓系細胞組成。在小鼠體內，MDSCs多表達Gr1和CD11 b。近年來，許多研究

3、表明髓系衍生抑制性細胞可在腫瘤、炎癥等病理狀態(tài)下產(chǎn)生積累，并進而在血液、二級淋巴器官以及病變組織局部增多，誘導免疫耐受形成，從而產(chǎn)生強烈的免疫抑制作用。但MDSCs在潰瘍性結腸炎相關性結腸癌的作用卻少有報道。本研究中，我們探索性通過小劑量AOM(10mg/kgWt)腹腔注射聯(lián)合飲用3個周期的3％DSS溶液建立潰瘍性結腸炎癌變的小鼠模型，通過檢測小鼠病變組織局部、骨髓及脾臟MDSCs的變化，從而探討MDSCs在潰瘍性結腸炎及其相關性結腸癌

4、發(fā)生發(fā)展中的作用，為由MDSCs介導的免疫逃逸提供新的證據(jù)，進而為抗腫瘤的免疫治療提供潛在的治療靶點。
　　 研究目的:建立潰瘍性結腸炎癌變的小鼠模型，通過該模型探討MDSCs在潰瘍性結腸炎相關性結腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用，以期為抗腫瘤的免疫治療開辟新的途徑。
　　 材料與方法:選擇6周齡C57BL/6雄性小鼠40只，隨機分為四組（每組各10只）:A組為造模組AOM+DSS組，B組為單純DSS組，C組為單純AOM組，D組為空

5、白對照組。所有動物均于動物房適應性喂養(yǎng)一周后，A組小鼠給予腹腔注射AOM(10mg/kgWt)1次，一周后予3％DSS溶液喂養(yǎng)7天，休息14天為一個循環(huán)，重復3個循環(huán)。B組和C組分別只給予3％DSS喂養(yǎng)或AOM腹腔注射，D組不予任何處理。實驗過程中記錄小鼠飲食情況、體重、大便、毛發(fā)顏色及精神狀態(tài)。實驗結束后，乙醚麻醉，頸椎脫臼處死小鼠，打開腹腔，留取肛門至回盲部整段大腸，在顯微鏡下觀察其病理變化，并通過免疫熒光組化方法，分析MDSCs在

6、病變小鼠大腸組織局部的聚集情況。同時分離股骨、脛骨和脾臟，分別取得骨髓細胞懸液和脾臟細胞懸液，經(jīng)流式細胞儀檢測病變小鼠骨髓和脾臟中MDSCs的比例。
　　 結果:
　　 1.建模結果:A組小鼠首次3％DSS溶液喂養(yǎng)后第5天即出現(xiàn)肉眼血便，正常飲水4天后基本恢復。第3周期結束，A組中所有小鼠大腸均可見腫塊產(chǎn)生，癌變率為50％(5/10)，主要位于近肛門側，其次為結腸中段，近口側未見腫瘤形成;B組小鼠于3％DSS溶液喂養(yǎng)期間

7、可見血便形成，恢復正常飲水后血便消失，病理組織觀察大腸組織炎癥細胞浸潤明顯，C、D組未見異常。
　　 2.免疫熒光組化結果:A、B組大腸粘膜局部MDSCs表達較C、D組明顯增多(P＜0.05);且A組較B組明顯升高(P＜0.05)。3.流式細胞分析結果:A、B組小鼠骨髓和脾臟中MDSCs比例較C、D組比例明顯升高(P＜0.05)，且A組較B組明顯升高(P＜0.05)。
　　 結論:
　　 1.小劑量致癌劑AOM腹