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文檔簡(jiǎn)介
1、炎癥性腸病(Inflammatory bowel disease,IBD),是一類(lèi)主要影響人類(lèi)胃腸道的慢性疾病,包括潰瘍性結(jié)腸炎和克羅恩病。雖然其具體的病理機(jī)制尚未完全明確,但現(xiàn)有的證據(jù)表明腸粘膜免疫調(diào)控紊亂和上皮屏障功能障礙共同引發(fā)了炎癥性腸病的發(fā)生。
芳香烴受體(AhR)是一種胞漿內(nèi)的轉(zhuǎn)錄因子,可由一系列的外界環(huán)境中的配體特異性激活。AhR的激活參與腸粘膜免疫的調(diào)控。有證據(jù)表明,在IBD病人的腸道組織中AhR的表達(dá)被抑制,
2、而給予AhR的配體6-甲酰基吲哚并[3,2b]-咔唑(FICZ)和四氯二苯并-p-二惡英(TCDD)可以緩解小鼠結(jié)腸炎模型中的炎癥反應(yīng)。雖然現(xiàn)有的一些研究已經(jīng)證實(shí)了AhR在炎癥性腸病中的保護(hù)作用,但是其作用的具體機(jī)制尚未明確。
目的:
白介素10(IL-10)是一種重要的抗炎因子,可以緩解腸粘膜炎癥。本研究通過(guò)外源性給予AhR的特異性激動(dòng)劑FICZ,研究活化的AhR對(duì)DSS誘導(dǎo)的小鼠結(jié)腸炎的保護(hù)作用并探討其機(jī)制是否是
3、通過(guò)上調(diào)腸上皮源IL-10的表達(dá)來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
方法:
1.給予小鼠4%的DSS喂養(yǎng)7天誘導(dǎo)小鼠結(jié)腸炎模型,兩天后腹腔注射AhR激動(dòng)劑FICZ。每天記錄小鼠體重,第8天收集小鼠結(jié)腸組織并測(cè)量長(zhǎng)度,切片并進(jìn)行HE染色和組織學(xué)分析。
2.從結(jié)腸組織中提取腸上皮細(xì)胞,用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)腸上皮細(xì)胞中IL-10的表達(dá),用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)炎性因子mRNA的表達(dá)。
3.在體外培養(yǎng)Caco-2細(xì)胞株,用FI
4、CZ處理細(xì)胞,或同時(shí)給予脂多糖(LPS)處理,用免疫印跡技術(shù)檢測(cè)IL-10和STAT3/P-STAT3的表達(dá),用用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測(cè)炎性因子mRNA的表達(dá)。
結(jié)果:
1.給予FICZ明顯緩解了DSS引起的小鼠體重下降;DSS處理后小鼠結(jié)腸的長(zhǎng)度幾乎縮短一半并伴有水腫和淤血,而給予FICZ后這些情況明顯改善;組織學(xué)分析顯示DSS處理后小鼠結(jié)腸上皮和隱窩有嚴(yán)重的缺損,而FICZ處理后明顯改善了這些損傷。
5、 2.與DSS處理組相比,給予FICZ明顯上調(diào)了腸上皮源IL-10的表達(dá);DSS處理后,促炎的炎性因子的mRNA表達(dá)明顯增高,而給予FICZ處理后炎性因子明顯下調(diào)。
3.體外培養(yǎng)Caco2細(xì)胞,給予LPS處理24小時(shí)或LPS和FICZ共同處理24小時(shí),LPS明顯上調(diào)了IL-1β和IL-6的mRNA的表達(dá),而FICZ明顯下調(diào)其表達(dá);同時(shí)無(wú)論是否有LPS的刺激,F(xiàn)ICZ均明顯促進(jìn)了IL-10在蛋白水平和mRNA水平的表達(dá)。
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