黃芩苷對DSS誘導(dǎo)的結(jié)腸炎小鼠Th22細胞及IL-22的影響.pdf

1、[目的]
　　建立DSS誘導(dǎo)的小鼠急性腸炎模型，觀察黃芩苷對炎癥性腸病小鼠模型Th22細胞比例及IL-22濃度的影響;分離小鼠脾臟淋巴細胞，使用不同濃度的含黃芩苷培養(yǎng)基體外培養(yǎng)，檢測各組淋巴細胞中Th22細胞比例;通過體內(nèi)和體外實驗探討黃芩苷治療IBD的免疫學機制。
　　[方法]
　　1.炎癥性腸病(IBD)小鼠模型的建立及分組
　　C57BL/6小鼠40只，SPF級，體重18～22g，隨機分為正常組（10只），

2、模型組（10只），黃芩苷組（10只），美沙拉嗪組（10只）。給予3.5％的葡聚糖硫酸鈉(DSS)自由飲用7天建立急性炎癥性腸病小鼠模型。造模完成后黃芩苷組給予黃芩苷(98％)80 mg/(kg·d)溶液灌胃，美沙拉嗪組給予美沙拉嗪0.1 mL/10g體重灌胃。正常組、模型組則給予生理鹽水0.1 mL/10g體重灌胃，以上各組每天灌胃1次，連續(xù)7天。于第15天處死所有小鼠，取小鼠外周血，脾臟及結(jié)腸。
　　2.體外淋巴細胞的培養(yǎng)

3、>　　處死30只正常C57BL/6小鼠，取脾臟，F(xiàn)icoll濃度離心法分離小鼠淋巴細胞，使用含不同濃度（0，10，20，40μM）的黃芩苷培養(yǎng)基無菌培養(yǎng)48小時。
　　3.檢測方法及指標
　　觀察小鼠一般情況，小鼠疾病活動指數(shù)(DAI)評分，結(jié)腸HE染色后進行組織病理學評分;使用流式細胞術(shù)檢測檢測各組小鼠外周血，脾臟中及體外培養(yǎng)的各組小鼠脾臟淋巴細胞中Th22細胞的比例;使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)檢測各模型組小鼠外周

4、血血清中IL-22的表達。
　　[結(jié)果]
　　1.黃芩苷組和美沙拉嗪組小鼠一般情況顯著好于模型組。
　　2.黃芩苷組和美沙拉嗪組給藥后第2天小鼠DAI評分均較模型組顯著降低（P＜0.05）。
　　3.黃芩苷組和美沙拉嗪組的病理學評分均較模型組顯著降低(P＜0.001)。
　　4.流式細胞術(shù)檢測各模型組中小鼠外周血及脾臟中Th22細胞比例結(jié)果顯示:與空白對照組比較，模型組Th22細胞的比例增高，差異有統(tǒng)計學意

5、義(P＜0.01)，黃芩苷組和美沙拉嗪組與模型組相比Th22細胞比例下降(P＜0.05)。
　　5.ELISA檢測各組小鼠外周血血清中IL-22的表達結(jié)果顯示:與空白對照組相比，模型組小鼠外周血血清中IL-22濃度升高(P＜0.01)，模型組IL-22濃度高于黃芩苷組和美沙拉嗪組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);
　　6.流式細胞術(shù)檢測體外培養(yǎng)的小鼠脾臟淋巴細胞Th22細胞比例結(jié)果顯示:在體外培養(yǎng)條件下，黃芩苷對小鼠脾臟淋

6、巴細胞向Th22細胞的分化起抑制作用，各組比較差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05);在IL-6刺激作用下，小鼠脾臟淋巴細胞Th22細胞比例上升，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.001);
　　[結(jié)論]
　　1.采用3.5％DSS自由飲用7天可用于構(gòu)建C57BL/6小鼠急性炎癥性腸病模型。
　　2.在炎癥性腸疾病發(fā)病期，黃芩苷對Th22細胞表現(xiàn)為抑制作用，并能夠降低IL-22的表達。這種藥物，細胞因子之間的共同效應(yīng)對于小鼠炎癥性腸