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1、利用Pichia pastoris酵母整合型質(zhì)粒pPICZaA-endo將人endostatin基因整合于Pichia pastoris酵母細(xì)胞染色體中,該質(zhì)粒具有釀酒酵母a因子的信號(hào)肽、zeocin的抗性基因.實(shí)驗(yàn)過(guò)程是將質(zhì)粒線性化后,電轉(zhuǎn)化Pichia pastoris甲醇酵母,質(zhì)粒轉(zhuǎn)入細(xì)胞后,質(zhì)粒上AOX1基因的5'啟動(dòng)子序列和3'轉(zhuǎn)錄終止子序列能與宿主細(xì)胞染色體發(fā)生同源重組,在發(fā)生單交換時(shí),使整個(gè)質(zhì)粒插入到宿主染色體中.通過(guò)含z
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