過表達(dá)CrkL對H9C2心肌細(xì)胞株生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的:觀察在正常及缺氧/復(fù)氧(anoxia/reoxygenation,A/R)培養(yǎng)條件下過表達(dá)CrkL基因?qū)9C2心肌細(xì)胞骨架、凋亡及增殖的影響。
　　 方法:應(yīng)用CrkL基因真核表達(dá)重組質(zhì)粒pCXN2-CrlL-Flag,經(jīng)脂質(zhì)體介導(dǎo)瞬時轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞H9C2,通過RT-PCR檢測CrkL mRNA的表達(dá)水平;Western Blot檢測CrkL蛋白的表達(dá)水平;共聚焦激光掃描顯微鏡(CLSM)觀察心肌細(xì)胞骨架變化;流式細(xì)胞術(shù)

2、(FCM)檢測心肌細(xì)胞的凋亡率;MTT比色法檢測心肌細(xì)胞的增殖。
　　 結(jié)果:重組質(zhì)粒pCXN2-CrkL-Flag轉(zhuǎn)染H9C2心肌細(xì)胞后,RT-PCR和Western檢測結(jié)果表明CrkL基因及蛋白能在H9C2心肌細(xì)胞中顯著表達(dá),差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01);CLSM觀察到在正常培養(yǎng)條件下過表達(dá)CrkL組均較空質(zhì)粒組及空白組心肌細(xì)胞F-actin增粗、密集、粘著斑增多,而在A/R培養(yǎng)條件下過表達(dá)CrkL組心肌細(xì)胞F-ac

3、tin基本正常,但空質(zhì)粒組及空白組F-actin排列紊亂,稀疏,胞漿內(nèi)應(yīng)力纖維明顯減少;FCM術(shù)檢測結(jié)果顯示在正常及A/R培養(yǎng)條件下過表達(dá)CrkL組均較空質(zhì)粒組及空白組心肌細(xì)胞的凋亡率顯著下降(P＜0.01);MTT法檢測證實(shí)在正常及A/R培養(yǎng)條件下過表達(dá)CrkL組均較空質(zhì)粒組及空白組心肌細(xì)胞的存活力顯著增強(qiáng)(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:過表達(dá)CrkL可使H9C2心肌細(xì)胞F-actin細(xì)胞骨架蛋白表達(dá)顯著增加,凋亡率顯著降低,