let-7e通過抑制PARP1介導的DNA損傷修復增加卵巢癌對順鉑的敏感性.pdf

1、化療耐藥是導致卵巢癌預后差的重要原因。鉑類藥物進入細胞后與DNA交聯(lián)導致DNA單鏈和雙鏈損傷，從而觸發(fā)凋亡，而DNA損傷修復功能增強是導致卵巢癌鉑類耐藥的機制之一。PARP1在DNA損傷修復中發(fā)揮關鍵作用，且是let-7e的預測靶點。我們的前期研究發(fā)現(xiàn)上調(diào)let-7e能夠增加卵巢癌細胞對順鉑的敏感性，本文旨在研究let-7e是否通過抑制PARP1介導的DNA損傷修復增加卵巢癌的化療敏感性。方法：原位雜交和免疫組化分別檢測let-7e和D

2、NA損傷修復關鍵蛋白PARP1、BRCA1、Rad51在卵巢癌組織中的表達。采用MTT和克隆形成實驗檢測卵巢癌細胞的順鉑敏感性。堿性和中性彗星實驗、γH2AX免疫熒光檢測DNA損傷修復。雙熒光素酶報告實驗檢測let-7e是否靶向作用于PARP1的3’UTR端。采用Fisher確切概率法、生存分析、受試者工作曲線（ROC）、cox和logistics回歸模型等統(tǒng)計方法探討let-7e和PARP1、BRCA1、Rad51的臨床意義。結(jié)果：原

3、位雜交結(jié)果顯示let-7e在化療耐藥組織中低表達，進一步證實了let-7e與化療耐藥相關。堿性和中性彗星實驗、γH2AX免疫熒光顯示上調(diào)let-7e后，DNA單鏈和雙鏈損傷修復被抑制，而下調(diào)let-7e，DNA修復功能則增強；且let-7e能夠負性調(diào)控雙鏈修復關鍵蛋白BRCA1和Rad51的表達。雙熒光素酶報告實驗證實let-7e能夠與PARP1的3’UTR端直接結(jié)合，并抑制其表達。對let-7e和PARP1進行同向上調(diào)和下調(diào)，發(fā)現(xiàn)le

4、t-7e能夠作用于PARP1抑制DNA單鏈和雙鏈損傷修復,體內(nèi)外實驗證實let-7e對PARP1的靶向調(diào)控最終能夠增加卵巢癌對順鉑的敏感性。動物實驗還發(fā)現(xiàn)與PARP1抑制劑類似，let-7e的模擬物agomir能夠增敏順鉑的毒性作用。Fisher確切概率法、Kaplan-meier生存分析，單因素cox和logistics回歸分析顯示let-7e低表達，PARP1、BRCA1、Rad51高表達與卵巢癌患者化療耐藥及較差的預后相關；ROC