鴨坦布蘇病毒E蛋白抗原表位的鑒定.pdf

1、抗原表位(Epitope)又稱為抗原決定簇(antigenic determinant，AD)，是抗原分子中被免疫系統(tǒng)，特別是抗體、B細(xì)胞、T細(xì)胞識(shí)別的部分。B細(xì)胞的BCR識(shí)別的表位為B細(xì)胞表位，T細(xì)胞的TCR識(shí)別的表位為T細(xì)胞表位。鑒定分析抗原表位對(duì)了解抗原物質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能，研制安全有效的表位疫苗以及研發(fā)基于表位診斷試劑具有重要意義。
　　 鴨坦布蘇病毒病是由鴨坦布蘇病毒(Duck Tembusu Virus，DTMUV)引起

2、的，以蛋鴨、種鴨產(chǎn)蛋驟然下降為主要臨床特征、以出血性卵巢炎為主要病變特征的急性傳染病。2010年初，我國(guó)的江浙滬地區(qū)陸續(xù)爆發(fā)該病，蛋鴨產(chǎn)蛋嚴(yán)重下降，肉鴨生長(zhǎng)遲緩，給我國(guó)養(yǎng)殖業(yè)造成了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。近兩年對(duì)該病毒的一些分子生物學(xué)特已經(jīng)進(jìn)行了深入研究，但迄今為止，對(duì)于該病毒的抗原表位還沒有報(bào)道。為深入了解病毒的抗原結(jié)構(gòu)，便于設(shè)計(jì)科學(xué)合理的疫苗和診斷試劑，我們對(duì)DTMUV浙江分離株（YY5株）進(jìn)行了抗原表位的鑒定。
　　 本研究RT-

3、PCR擴(kuò)增出鴨坦布蘇病毒YY5株的E蛋白基因，插入pMBP-c表達(dá)載體進(jìn)行原核表達(dá)，獲得了具有良好生物活性的可溶性融合蛋白MBP-E。用純化的重組蛋白MBP-E為抗原免疫Balb/C小鼠，經(jīng)細(xì)胞融合，選擇培養(yǎng)，成功篩選出兩株抗鴨坦布蘇病毒E蛋白結(jié)構(gòu)域Ⅲ(domainⅢ，DⅢ)的單克隆抗體，分別命名為AE4和BD10。兩株單克隆抗體間接免疫熒光試驗(yàn)(IFA)結(jié)果呈陽(yáng)性，而僅有BD10能與MBP-E重組蛋白進(jìn)行Western blot反應(yīng)，

4、可初步推斷BD10識(shí)別E蛋白DⅢ區(qū)的一個(gè)B細(xì)胞線性表位。針對(duì)E蛋白的DⅢ區(qū)設(shè)計(jì)了一系列末端相互重疊的15個(gè)短肽，這些短肽與MBP進(jìn)行融合表達(dá)，用BD10對(duì)15個(gè)短肽融合蛋白進(jìn)行Western blot和ELISA鑒定，精確定位BD10識(shí)別的一個(gè)B細(xì)胞線性抗原表位。將純化的表位融合蛋白MBP-EP385對(duì)小鼠進(jìn)行免疫，獲得的多克隆抗體能夠識(shí)別DⅢ蛋白和MBP-E融合蛋白，表明表位EP385具有良好的免疫原性。
　　 結(jié)果表明，通過