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文檔簡介
1、目的:本課題前期通過體、內(nèi)外實(shí)驗(yàn)初次成功篩選并合成了卵巢癌特異性結(jié)合肽(Ovariancancer specific targeting peptide, OSTP),并通過體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)OSTP具有促卵巢癌細(xì)胞A2780細(xì)胞凋亡及增敏紫杉醇促卵巢癌A2780細(xì)胞凋亡的作用,本實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步研究OSTP通過IKK/NF-κB通路促卵巢癌細(xì)胞及增敏紫杉醇促卵巢癌細(xì)胞凋亡。將為OSTP用于臨床抗卵巢癌治療奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
方法:1.合成O
2、STP。
2.體外培養(yǎng)卵巢癌 A2780細(xì)胞株,將生長狀態(tài)處于對數(shù)期的卵巢癌A2780細(xì)胞株,隨機(jī)分成1640空白對照組、OSTP15min組、OSTP30min組、OSTP1h組、OSTP3h組、OSTP6h組及OSTP12h組,分別于15min、30min、1h、3h、6h及12h后提取細(xì)胞蛋白,通過Western Blot實(shí)驗(yàn),檢查各組IKKβ、磷酸化IKKβ、NF-κB(p65)及磷酸化NF-κB(p65)的表達(dá)。
3、r> 3.體外培養(yǎng)卵巢癌 A2780細(xì)胞株,將生長狀態(tài)處于對數(shù)期的卵巢癌A2780細(xì)胞株,隨機(jī)分成1640空白對照組、DMSO對照組、紫杉醇組、OSTP組、OSTP聯(lián)合紫杉醇組,24小時(shí)后分別提取各組細(xì)胞蛋白,通過Western Blot實(shí)驗(yàn),檢查各組IKKβ、磷酸化IKKβ、NF-κB(p65)及磷酸化NF-κB(p65)的表達(dá)。
結(jié)果:1.成功合成 OSTP。
2.與對照組相比,OSTP15min組、30min
4、組、1h組、3h組、6h組、12h組中的IKKβ蛋白表達(dá)水平無顯著差異(p>0.05)。與對照組相比OSTP15min組、30min組、12h組中的IKKβ(Tyr188)磷酸化蛋白表達(dá)水平降低(p<0.01);而OSTP1h組、3h組、6h組中IKKβ(Tyr188)磷酸化蛋白表達(dá)水平升高(p<0.01),且OSTP15min組IKKβ(Tyr188)磷酸化蛋白表達(dá)水平最低,OSTP3h組IKKβ(Tyr188)磷酸化蛋白表達(dá)水平最高
5、。
3.與對照組相比,OSTP1h組、3h組、6h組、12h組中的 NF-κB(p65)蛋白表達(dá)水平降低(p<0.01);自O(shè)STP處理1h起,隨時(shí)間延長,NF-κB(p65)蛋白表達(dá)水平逐漸減低(p<0.01)。與對照組相比 OSTP15min組、30min組、1h組、3h組、6h組、12h組中的NF-κB(p65 Ser311)磷酸化蛋白表達(dá)水平降低(p<0.01);且OSTP30min組NF-κB(p65 Ser311)
6、磷酸化蛋白表達(dá)水平最低(p<0.01)。
4.與對照組相比,紫杉醇組中的 IKKβ蛋白表達(dá)水平降低(p<0.01);與對照組相比,OSTP組中的IKKβ蛋白表達(dá)水平無顯著性差異(p>0.05);與紫杉醇組相比,聯(lián)合用藥組中的 IKKβ蛋白表達(dá)水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。與對照組相比 OSTP組、紫杉醇組中的IKKβ(Tyr188)磷酸化蛋白表達(dá)水平降低(p<0.01);與OSTP組、紫杉醇組相比,聯(lián)合用藥組中的IKKβ(
7、Tyr188)磷酸化蛋白表達(dá)水平降低(p<0.01);差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
5.與對照組相比,OSTP組、紫杉醇組中的NF-κB(p65)蛋白表達(dá)水平降低(p<0.01)。與 OSTP組、紫杉醇組相比,聯(lián)合用藥組中的 NF-κB(p65)蛋白表達(dá)水平降低(p<0.01);均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。與對照組相比OSTP組、紫杉醇組中的NF-κB(p65 Ser311)磷酸化蛋白表達(dá)水平降低(p<0.01);與 OSTP組、紫杉醇組相比
8、,聯(lián)合用藥組中的NF-κB(p65 Ser311)磷酸化蛋白表達(dá)水平降低(p<0.01);均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
結(jié)論:1. OSTP促卵巢癌A2780細(xì)胞凋亡的作用,其機(jī)制可能與IKK/NF-κB信號通路中的關(guān)鍵蛋白IKKβ(Tyr188)磷酸化蛋白、NF-κB(p65)及NF-κB(p65 Ser311)磷酸化蛋白表達(dá)降低有關(guān)。
2. OSTP增敏紫杉醇誘導(dǎo)卵巢癌A2780細(xì)胞凋亡作用,其機(jī)制可能與 IKK/NF-κ
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