鉛致原代培養(yǎng)大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷及JWA mRNA表達(dá)改變.pdf

1、鉛是一種化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定的重金屬毒物，神經(jīng)系統(tǒng)是鉛毒作用的重要靶器官。鉛暴露可降低細(xì)胞中超氧化物歧化酶、過(guò)氧化氫酶等抗氧化酶的活性及谷胱甘肽等抗氧化物質(zhì)的含量，引起細(xì)胞氧化損傷，因此鉛的神經(jīng)毒性與氧化應(yīng)激及其所致氧化損傷密切相關(guān)。JWA是活躍的環(huán)境應(yīng)答基因，廣泛參與調(diào)控多種環(huán)境因素誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激，保護(hù)細(xì)胞免受氧化損傷。目前尚未見(jiàn)JWA在鉛毒性中作用的相關(guān)報(bào)道，本研究以體外培養(yǎng)的新生大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞為研究對(duì)象，研究JWA在鉛神經(jīng)毒性中的表達(dá)變

2、化及可能機(jī)制。
　　目的：觀察鉛對(duì)大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞中各氧化應(yīng)激指標(biāo)以及JWA基因表達(dá)的影響，探討JWA基因參與神經(jīng)細(xì)胞鉛氧化應(yīng)激作用可能機(jī)制，為進(jìn)一步從分子水平探討鉛的神經(jīng)毒性機(jī)制提供新的線(xiàn)索和依據(jù)。
　　方法：取新生24 h內(nèi)的 SD大鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞進(jìn)行原代培養(yǎng)并用免疫細(xì)胞化學(xué)方法鑒定；將體外生長(zhǎng)良好的皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞，分別用終濃度為0μmol/L、31μmol/L、54μmol/L、92μmol/L、150μmol/L醋

3、酸鉛神經(jīng)細(xì)胞維持培養(yǎng)液處理一定時(shí)間，MTT法檢測(cè)細(xì)胞存活情況，并檢測(cè)細(xì)胞超氧化物歧化酶（SOD）活力、丙二醛（MDA）含量、過(guò)氧化氫酶（CAT）活力和谷胱甘肽（GSH）含量， QRT-PCR技術(shù)檢測(cè)皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞JWA mRNA的表達(dá)量。
　　結(jié)果：（1）形態(tài)學(xué)觀察和免疫組織化學(xué)鑒定發(fā)現(xiàn)，體外原代培養(yǎng)的皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞在培養(yǎng)第7d左右生長(zhǎng)狀態(tài)良好，神經(jīng)細(xì)胞所占比例較高，可用于之后鉛損傷模型的建立。（2）隨著醋酸鉛濃度的逐漸升高，培養(yǎng)的大

4、鼠皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量逐漸減少。染鉛24 h和48 h，92μmol/L和150μmol/L醋酸鉛組同其他劑量組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），92μmol/L醋酸鉛作用下平均 OD值分別為0.218±0.008和0.181±0.006，而150μmol/L醋酸鉛作用下平均OD值分別為0.199±0.008和0.166±0.009。篩選出醋酸鉛的適宜作用濃度為92μmol/L，適宜作用時(shí)間為24 h。（3）不同濃度醋酸鉛分別作用皮質(zhì)神經(jīng)

5、元6 h、12 h、24 h、48 h，SOD活力、CAT活力和GSH含量較對(duì)照組均有明顯下降（P＜0.05），而 MDA含量較對(duì)照組均有明顯升高（P＜0.05），皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi) SOD活力、CAT活力和 GSH含量與染鉛劑量呈負(fù)相關(guān)關(guān)系（P＜0.01），MDA含量與染鉛劑量呈正相關(guān)關(guān)系（P＜0.01）。（4）隨著鉛含量的升高，各鉛處理組細(xì)胞 JWAmRNA的表達(dá)水平呈逐漸下降趨勢(shì)（P＜0.05）；鉛處理的同時(shí)加入適當(dāng)?shù)某趸锲缁福?/p>