鹽酸小檗堿對LPS誘導(dǎo)的炎性反應(yīng)的抗炎作用研究.pdf

1、鹽酸小檗堿是從黃連、黃柏、三顆針等植物中提取的異喹啉類生物堿，已有報(bào)道證實(shí)其具有一定的抗炎作用，然而其發(fā)揮抗炎作用的分子機(jī)制尚未見系統(tǒng)性的報(bào)導(dǎo)。本試驗(yàn)首先研究鹽酸小檗堿在RAW264.7小鼠單核-巨噬細(xì)胞上的抗炎機(jī)制。先通過CCK-8法檢測鹽酸小檗堿對RAW264.7細(xì)胞的毒性作用，再采用LPS刺激RAW264.7細(xì)胞誘導(dǎo)炎癥模型，并添加不同濃度的鹽酸小檗堿(12.5、25、50μg/mL)。分別用ELISA法和qRT-PCR法測定促炎

2、癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-6及IL-1β的含量和mRNA表達(dá)量;采用EMSA法測定NF-κB的入核表達(dá)水平;采用WB法測定TLR4和NF-κB的蛋白表達(dá)水平。其次，利用乳池灌注LPS構(gòu)建小鼠乳腺炎模型，探索鹽酸小檗堿對LPS誘導(dǎo)小鼠乳腺炎的抗炎作用機(jī)制。試驗(yàn)選擇60只分娩后5～7d的泌乳期母鼠，隨機(jī)分為6組，以不同濃度(5、10、20mg/kg)的鹽酸小檗堿和地塞米松(5mg/kg)給藥，并在灌注LPS后第24h采取乳腺組織。通過組織

3、切片觀察乳腺組織病理變化;利用ELISA和qRT-PCR法測定組織中促炎癥細(xì)胞因子TNF-α、IL-6及IL-1β的含量和mRNA表達(dá)水平;采用WB法測定TLR4和NF-κB的蛋白表達(dá)水平。
　　體外細(xì)胞試驗(yàn)結(jié)果表明:鹽酸小檗堿在（12.5、25、50μg/mL）的濃度下對RAW264.7細(xì)胞沒有毒性作用;鹽酸小檗堿能夠顯著抑制LPS誘導(dǎo)的TNF-α、IL-6和IL-1β的表達(dá)，并呈現(xiàn)劑量依賴性;此外，鹽酸小檗堿可以極顯著抑制p6

4、5的入核表達(dá)，顯著抑制TLR4的蛋白水平表達(dá)和p65、IκB的磷酸化水平。體內(nèi)小鼠試驗(yàn)結(jié)果表明:LPS刺激組小鼠乳腺組織的腺泡中含有大量的嗜中性粒細(xì)胞，且有大量腺泡上皮細(xì)胞脫落，乳腺腺泡壁明顯增厚，有充血情況;TNF-α、IL-1β及IL-6含量和mRNA表達(dá)量顯著增加。與LPS刺激組相比，鹽酸小檗堿在(5、10、20mg/kg)的濃度下能明顯降低LPS刺激的小鼠乳腺組織的炎性損傷;能夠顯著抑制乳腺炎癥組織中的細(xì)胞因子TNF-αIL-6