乳腺微浸潤性癌臨床病理特征和導(dǎo)管內(nèi)癌浸潤機制的研究.pdf

1、目的：
　　探討乳腺微浸潤性癌和導(dǎo)管內(nèi)癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)的臨床病理特征、分子分型及預(yù)后情況。
　　研究上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)和肌上皮表型改變是否參與導(dǎo)管內(nèi)癌進(jìn)展到浸潤性乳腺癌的進(jìn)程。
　　方法：
　　收集131例乳腺微浸潤性癌和451例導(dǎo)管內(nèi)癌。通過免疫組化檢測ER、PR、HER2和 Ki67。對微浸

2、潤性癌進(jìn)行臨床病理特征的評估，如臨床表現(xiàn)，病理特征，分子亞型和臨床預(yù)后結(jié)果，并與導(dǎo)管內(nèi)癌作比較。
　　以導(dǎo)管內(nèi)癌和浸潤性癌為研究對象，通過免疫組化檢測EMT標(biāo)記物及肌上皮細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)情況。使用TGF-β1誘導(dǎo)乳腺腺上皮表型細(xì)胞MCF-7發(fā)生EMT，并建立肌上皮表型細(xì)胞MDA-MB-231與MCF-7的共培養(yǎng)體系。觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,通過QRT-PCR和Western blot檢測EMT相關(guān)標(biāo)記物的表達(dá)水平， MTT法檢測細(xì)胞增

3、殖能力的改變，劃痕實驗和Transwell實驗檢測細(xì)胞遷移及侵襲能力的變化,通過ELISA法檢測TGF-β1對共培養(yǎng)上清液MMP-9和IL-6分泌量的影響。
　　結(jié)果：
　　1、比較乳腺微浸潤性癌和導(dǎo)管內(nèi)癌的臨床病理特征，在腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移方面微浸潤性癌高于導(dǎo)管內(nèi)癌；而在年齡、絕經(jīng)狀況、家族史、分子分型方面，兩者差異無統(tǒng)計學(xué)意義。比較不同分子分型乳腺微浸潤性癌與臨床病理特征，Her-2過表達(dá)型和TNBCs在組織學(xué)級別方面

4、較高；而在年齡、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、絕經(jīng)狀況、家族史方面，不同分子分型之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。比較不同分子分型導(dǎo)管內(nèi)癌與臨床病理特征，Her-2過表達(dá)型和TNBCs在年齡、腫瘤直徑、核級別方面較高；而在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、家族史方面，不同分子分型之間差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2、隨訪時間自治療時間起，中位隨訪時間分別為69和62個月。乳腺微浸潤性癌和導(dǎo)管內(nèi)癌的5年總生存率分別為99.0％和99.2%，微浸潤性癌與導(dǎo)管內(nèi)癌的OS差異無統(tǒng)計學(xué)意

5、義。乳腺微浸潤性癌和導(dǎo)管內(nèi)癌的5年無病生存率分別為95.2%和95.9%，微浸潤性癌和導(dǎo)管內(nèi)癌的DFS差異無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　3、以正常乳腺組織、導(dǎo)管內(nèi)癌和浸潤性癌為研究對象，通過免疫組化檢測EMT標(biāo)記物的表達(dá)情況。E-cadherin在正常組織表達(dá)較高，在導(dǎo)管內(nèi)癌組及IDC組表達(dá)降低。N-cadherin、Snail、Vimentin、Twist和Zeb1在正常組織中不表達(dá)，在導(dǎo)管內(nèi)癌組及IDC組表達(dá)明顯增高，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

6、
　　4、以正常乳腺組織、導(dǎo)管內(nèi)癌和浸潤性癌為研究對象，通過免疫組化檢測肌上皮細(xì)胞標(biāo)記物的表達(dá)情況。SMA、p63、Calponin蛋白表達(dá)在正常組織和導(dǎo)管內(nèi)癌中呈陽性表達(dá)，在浸潤性癌幾乎不著色。
　　5、TGF-β1刺激MCF-7細(xì)胞誘導(dǎo)發(fā)生EMT，部分處理組細(xì)胞較對照組發(fā)生形態(tài)學(xué)變化。通過QRT-PCR檢測TGF-β1刺激MCF-7后EMT相關(guān)標(biāo)記物mRNA的表達(dá)水平，處理組較對照組E-cadherin下調(diào)，Viment

7、in、N-cadherin上調(diào)。通過Western blot檢測TGF-β1刺激MCF-7后EMT相關(guān)標(biāo)記物蛋白的表達(dá)水平，處理組較對照組E-cadherin下調(diào)，Vimentin、N-cadherin上調(diào)。MTT法發(fā)現(xiàn)處理組較對照組細(xì)胞增殖沒有差異。劃痕實驗檢測TGF-β1刺激MCF-7后，處理組較對照組細(xì)胞遷移明顯增加。
　　6、TGF-βl影響共培養(yǎng)體系下MDA-MB-231的形態(tài)學(xué)發(fā)生變化。TGF-βl對共培養(yǎng)體系下MDA

8、-MB-231的增殖能力沒有影響。TGF-βl增強共培養(yǎng)條件下MDA-MB-231的遷移和侵襲能力。TGF-βl提高共培養(yǎng)條件下MDA-MB-231分泌 MMP-9和IL-6的含量。
　　結(jié)論：
　　總之，乳腺微浸潤性癌與導(dǎo)管內(nèi)癌在臨床病理特征及預(yù)后方面相似。相比于導(dǎo)管內(nèi)癌，浸潤性癌中間質(zhì)標(biāo)記物表達(dá)增多、E-cadherin表達(dá)缺失和肌上皮表型標(biāo)記物表達(dá)下降。通過TGF-β1的刺激，可以有效促進(jìn)乳腺癌腺上皮表型細(xì)胞的侵襲和遷