冠狀動脈旁路移植術(shù)患者骨髓和循環(huán)祖細(xì)胞的臨床研究.pdf

1、目的：缺血性心臟病是目前世界范圍內(nèi)主要的致死和致殘疾病,常合并其他全身性疾病。骨髓和循環(huán)祖細(xì)胞在缺血性心臟病患者細(xì)胞治療和再血管化治療中起重要作用。本文主要研究：冠心病患者圍術(shù)期危險(xiǎn)因素與骨髓單個(gè)核細(xì)胞(bone marrow mononuclear cdls,BMMNCs)及骨髓祖細(xì)胞的關(guān)系；冠心病圍術(shù)期危險(xiǎn)因素與循環(huán)祖細(xì)胞的關(guān)系；冠狀動脈旁路移植術(shù)對循環(huán)祖細(xì)胞的影響。
　　 方法：⑴經(jīng)胸骨骨穿采集44例患者骨髓,應(yīng)用Fico

2、n淋巴細(xì)胞分離液密度梯度離心法分離BMMNCs,計(jì)數(shù)并應(yīng)用臺盼藍(lán)拒染法檢測其活性,普通顯微鏡行形態(tài)學(xué)觀察,用DAPI標(biāo)記行熒光觀察；應(yīng)用流式細(xì)胞儀分析檢測CD34+、CD133+和CD34+CD133+細(xì)胞的含量；應(yīng)用集落形成試驗(yàn)和細(xì)胞遷移試驗(yàn)觀察細(xì)胞功能。⑵前瞻性選擇單純行冠狀動脈旁路移植術(shù)患者51名,在術(shù)中采集患者骨髓,于術(shù)前、術(shù)后第1天晨、術(shù)后第3天及術(shù)后第5天獲得患者外周靜脈血,應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測循環(huán)CD34+CD45dim細(xì)胞

3、、CD133+CD45dim細(xì)胞和CD34+CD133+CD45dim細(xì)胞水平,應(yīng)用集落形成試驗(yàn)和遷移試驗(yàn)離體評價(jià)骨髓和循環(huán)祖細(xì)胞的功能；應(yīng)用Elisa試劑盒檢測血漿G-CSF、SDF-1α和VEGF水平。
　　 結(jié)果：①術(shù)中經(jīng)胸骨抽取20ml胸骨骨髓可獲到10-89×106個(gè)BMMNCs,臺盼藍(lán)染色拒染率95％以上,形態(tài)為均一大小的單個(gè)核細(xì)胞,等量的骨髓血獲得的BMMNcs的量與患者年齡之間存在負(fù)相關(guān)關(guān)系(n=44,r=-0.

4、788,p=0.001)；流式細(xì)胞儀檢測CD34+細(xì)胞占0.94±0.39％,CD133+細(xì)胞占0.46±0.28％,CD34+CD133+細(xì)胞占0.53+0.26％,糖尿病患者骨髓CD34+和CD133+細(xì)胞水平明顯較非糖尿病患者為低；高齡、女性和心功能較差與骨髓祖細(xì)胞集落形成能力降低有關(guān),Euroscore評分可作為骨髓祖細(xì)胞集落形成能力降低的預(yù)測變量；CD34+細(xì)胞水平與骨髓單個(gè)核細(xì)胞的遷移能力存在明顯的正相關(guān)。②術(shù)前外周血循環(huán)中

5、每10000個(gè)白細(xì)胞中含CD34+CD45dim細(xì)胞1.51±1.26,CD133+CD45dim細(xì)胞1.16±0.85,CD34+CD133+CD45dim細(xì)胞1.86±1.59.男性和吸煙患者CD34+CD45dim細(xì)胞水平較高,心功能較差的患者CD133+CD45dim細(xì)胞和CD34+CD133+CD45dim細(xì)胞水平較低；隨著年齡增加,循環(huán)祖細(xì)胞的集落形成能力下降(r=-0.786,p<0.001),應(yīng)用他汀類藥物的患者循環(huán)祖細(xì)

6、胞的集落形成能力較強(qiáng){7.48±3.03(33)vs5.50±2.71(18),p=0.025},男性患者或合并外周動脈疾病或冠脈左主干疾病的患者外周血單個(gè)核細(xì)胞的遷移能力較高。③無論是體外還是非體外冠狀動脈旁路移植術(shù),術(shù)后循環(huán)CD34+CD45dim細(xì)胞水平及CD133+CD45dim祖細(xì)胞水平均升高,并且體外循環(huán)手術(shù)后較非體外循環(huán)術(shù)后患者循環(huán)祖細(xì)胞水平變化大；循環(huán)祖細(xì)胞術(shù)后的升高伴隨著細(xì)胞因子SDF-1α和G-CSF的升高,而骨髓單

7、個(gè)核細(xì)胞的遷移能力與外周血?jiǎng)訂T的祖細(xì)胞水平之間存在明顯的正相關(guān)。
　　 結(jié)論：⑴經(jīng)胸骨應(yīng)用密度梯度離心法可獲得足夠數(shù)量的BMMNCs作為缺血性心臟病治療的供體細(xì)胞,年齡、性別、糖尿病、心功能及Euroscore評分與BMMNCs數(shù)量和功能有關(guān)。⑵循環(huán)祖細(xì)胞水平在女性和心功能較差的患者較低,循環(huán)祖細(xì)胞的功能隨著年齡的增加而降低,術(shù)前應(yīng)用他汀類藥物增強(qiáng)循環(huán)祖細(xì)胞功能。⑶冠狀動脈旁路移植術(shù)患者術(shù)后循環(huán)祖細(xì)胞水平升高,與血漿G-CSF和