rolB基因在棉花基因組中轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)基因系耐旱性研究.pdf

1、分類號(hào):華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文陽B基因在棉花基因組中轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)基因系耐旱性研究AnalysisofrolBgenetranseriPtionincottongellomeandinvestigationonthedroughttoleranceofthetransgenielines研究生:曹燕燕指導(dǎo)教師:楊業(yè)華教授專業(yè):作物遺傳育種獲得學(xué)位名稱:農(nóng)學(xué)碩士研究方向:轉(zhuǎn)基因棉花育種獲得學(xué)位時(shí)間:2008年6月華中農(nóng)業(yè)大學(xué)植物科學(xué)技術(shù)學(xué)院二

2、00八年六月rolB基因在棉花基因組中轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)基因系耐早性研究2.1.1.4培養(yǎng)基...................................................................……，...................……262.1.1.5儀器和設(shè)備.......................................................……，................

3、.......……262.1.2實(shí)驗(yàn)方法.....……，........................................................……，.......................……262.1.2.1菌液的制備.......................................................……，.......................……262.1.2.2質(zhì)粒

4、DNA的提取..........................................................................……272.1.2.3小量法抽提棉花DNA(PEx法).................................……，............……282.1.2.4棉花基因組DNA的提取(CTAB大量法)................................……

5、292.1.3轉(zhuǎn)化植株的PCR檢測(cè)............................................................................……302.2轉(zhuǎn)rolB基因棉花的基因表達(dá)分析....……，......................................................……312.2.1棉花基因組總RNA的抽提……，.............……，...

6、.....................................……312.2.2轉(zhuǎn)化植株的Nthem雜交檢測(cè)...............................……，.......................……332.2.2.1Nthem雜交前的準(zhǔn)備和試劑.....................................................……332.2.2.2RNA的提取........

7、...........................................................................……332.2.2.3RNA的電泳分離和Nthem轉(zhuǎn)移...............................................……332.2.2.4預(yù)雜交.........................................................

8、....................................……342.2.2.5探針的制備及標(biāo)記.........................................................................……342.2.2.6雜交.........................................……，..............……，..................

9、.……，.，……352.2.2.7洗膜.................……，.........................................................................……352.2.2.8壓片及成像................................................................................……，.…:352.3結(jié)

10、果和分析..........……，......................................................................................……352.3.1轉(zhuǎn)基因植株的PCR檢測(cè)........................................................................……352.3.2轉(zhuǎn)基因植株的Nthem雜交檢測(cè).

11、..........................……，.......................……372.3.2.1轉(zhuǎn)基因植株總RNA的提取............................……，.......................……372.3.2.2Nthem雜交檢測(cè)...............................……，.............................……，..…37

12、2.4結(jié)論...................................................................................................................……39第三章轉(zhuǎn)rolB基因棉花抗旱性和種子休眠特性研究.........................................……413.1實(shí)驗(yàn)材料....................

13、...........................……，.....................................................……413.2實(shí)驗(yàn)方法……，......................................……，.......................................................……413.2.1轉(zhuǎn)基因棉花抗旱性的調(diào)查研究.....

14、...........................……，.......................……413.2.2種子休眠特性研究....……，.......................................................................……423.3結(jié)果與分析............................................................

15、.............……，.......................……433.3.1轉(zhuǎn)基因棉花抗旱性調(diào)查結(jié)果..................................................................……433.3.1.1在移栽1個(gè)月內(nèi)不同時(shí)間進(jìn)行死亡株數(shù)的調(diào)查.................……，.……433.3.1.2反復(fù)干旱法苗期抗旱性鑒定...................

16、........……，.......................……433.3.1.3進(jìn)行新葉大小的分析................................……，.......……，................……443.3.1.4在盛花期進(jìn)行葉水勢(shì)和脯氨酸累積含量的測(cè)定.，.......................……443.3.1.5棉花莖粗的調(diào)查與分析結(jié)果..........................