左歸丸對血管生成體外三維模型的影響及其與卵巢PLGF、Flt-1的關系.pdf

1、目的：觀察高效液相色譜（High performance liquid chromatography，HPLC）監(jiān)測制備的左歸丸含藥血清對血管生成體外三維模型及左歸丸對雷公藤多苷致卵巢功能低下大鼠卵巢胎盤生長因子（Placenta growth factor，PLGF）及酪氨酸激酶（Fms-like tyrosine kinase，Flt-1）表達的影響，探討左歸丸促進血管生成的作用機制。
　　方法：
　?。?）將45只SD

2、（Sprague-Dawley）雌性大鼠，220±20g，分為大鼠空白血清組（蒸餾水11g/kg），左歸丸浸膏低劑量組（11g/kg）、左歸丸浸膏高劑量組（33g/kg）灌胃一次后，于不同時間點采血，制備左歸丸含藥血清；HPLC監(jiān)測下選取藥物成分峰值最大時間點的含藥血清進行人臍靜脈血管內皮細胞（Human umbilical vein endothelial cells，HUVEC）體外三維培養(yǎng)；四甲基偶氮唑藍（Methyl thiaz

3、olyl tetrazolium，MTT）比色法觀察左歸丸含藥血清對HUVEC增殖的影響，I型鼠尾膠原表面培養(yǎng)法建立HUVEC血管生成三維模型。酶聯免疫吸附試驗（Enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）檢測大鼠血清雌二醇（estradiol，E2）、血管內皮生長因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）水平。
　?。?）將40只SD雌性大鼠180±

4、20g，分為空白組（8只）和模型組（32只），模型組予雷公藤多苷片懸浮液50mg/kg灌胃，持續(xù)14天，制作卵巢功能低下大鼠模型，造模成功的大鼠隨機分為模型組（蒸餾水20g/kg）、倍美力組（65ug/kg）、左歸丸低劑量組（11g/kg）、左歸丸高劑量組（33g/kg），灌胃20天，觀察各組大鼠動情周期變化，計算卵巢、子宮指數，蘇木精-伊紅（Hematoxylin and eosin，HE）染色觀察卵巢組織形態(tài)，免疫組化法及蛋白印跡法

5、（Western blot，WB檢測大鼠卵巢組織PLGF及其受體Flt-1的表達情況。
　　結果：
　?。?）左歸丸灌胃后2小時達最高藥物吸收峰值。左歸丸浸膏低劑量組（72h），高劑量組（24h、48h、72h）對HUVEC均有增殖作用（P＜0.05或P＜0.01）。左歸丸低、高劑量組可增加內皮小管的面積、長度、管徑及生成指數（P＜0.01），可明顯提高大鼠血清E2、VEGF水平（P＜0.05或P＜0.01）。
　　（

6、2）卵巢功能低下大鼠動情周期紊亂延長，治療后大鼠動情周期逐漸恢復至正常。與模型組相比，各治療組的卵巢、子宮指數增高（P＜0.05或P＜0.01），各級生長卵泡、黃體及卵巢血管數增多（P＜0.05或P＜0.01），閉鎖卵泡數量減少（P＜0.05或P＜0.01）。各治療組PLGF、Flt-1累積光密度值及蛋白表達量增高（P＜0.01）。
　　結論：
　　（1）HPLC監(jiān)測制備的左歸丸含藥血清可以促進血管內皮細胞的增殖，改善三維小