功能磁共振活體評(píng)價(jià)p53治療人類(lèi)結(jié)腸癌早期療效的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一章人類(lèi)結(jié)腸癌裸鼠移植瘤模型制作及MR成像　　引言：人類(lèi)結(jié)腸癌鼠模型對(duì)探索中晚期結(jié)腸癌治療方法有重要意義。 本研究目的： 1.建立適宜于MR成像的人類(lèi)結(jié)腸癌肝臟、皮下移植瘤的標(biāo)準(zhǔn)荷瘤裸鼠模型，為新的診斷與治療方法的在體評(píng)價(jià)的臨床前期研究提供一個(gè)動(dòng)物模型。 2.探討利用臨床型醫(yī)用1.5TMR成像儀進(jìn)行荷瘤裸鼠MR成像的可靠方法，包括常規(guī)MR成像，1H-MRS以及DWI。 結(jié)果： 一、接種成功情況

2、與動(dòng)物生存種植后41天均在皮下形成最大徑線(xiàn)6.5mm～18.1mm、容積約120.45 mm3～2248.01mm3的腫瘤塊，4只鼠腫瘤最小徑線(xiàn)大于1cm；42天在肝臟形成最大徑線(xiàn)約5.3mm～12.5mm、容積約85.48 mm3～910.11mm3腫瘤塊，1只鼠腫瘤最小徑線(xiàn)大于1cm。檢查結(jié)束無(wú)荷瘤鼠死亡。 二、MR表現(xiàn) (一)常規(guī)MR成像荷瘤鼠皮下腫瘤與肝臟腫瘤在常規(guī)MR圖像上，T1WI為等信號(hào)，T2WI為不均勻高

3、信號(hào)，中央部位呈更高信號(hào)。 (二)DWI 1.信號(hào) ①DWI圖：b值=100時(shí)呈極高信號(hào)，隨著b值增加，中央部分信號(hào)降低，逐步呈稍高、等或稍低信號(hào)。 ②ADC圖：b值=100時(shí)呈等信號(hào)，隨著b值增加，中央部分信號(hào)增高，逐步呈稍高信號(hào)或高信號(hào)；周邊部分信號(hào)降低，逐步呈稍低信號(hào)、低信號(hào)。 ③EADC圖：b值=100時(shí)呈等信號(hào)，隨著b值增加，中央部分信號(hào)降低，逐步呈稍低信號(hào)、低信號(hào)，周邊部分信號(hào)升高，逐

4、步呈稍高信號(hào)、高信號(hào)。 2.層次 隨著b值增高，圖像解剖分辨率越高，層次越清晰。在ADC圖像上b值≥800 100％圖像層次清晰，與T2WI圖像分辨率接近。在EADC圖像上，b≥700 100％圖像層次清晰，與T2WI圖像分辨率接近。 3.ADC值與EADC值：隨著b值的增加，ADC值與EADC值降低。 三、病理 HE切片上腫瘤內(nèi)可見(jiàn)壞死區(qū)，可見(jiàn)印戒樣細(xì)胞與腺管狀結(jié)構(gòu)；免疫組化染色p53≥+。

5、 四、MR成像與病理對(duì)比 (一)大小MR T2WI測(cè)得的腫瘤體積與大體病理標(biāo)本測(cè)得的體積大小差別無(wú)顯著性(p＞0.05)。 (二)腫瘤壞死病理切片示腫瘤中央?yún)^(qū)域壞死，MRI可見(jiàn)壞死區(qū)T2wWI呈更高信號(hào)，b值大于500s／mm2ADC圖上為稍高或高信號(hào)，高于周?chē)菈乃绤^(qū)；EADC圖上呈等信號(hào)或低信號(hào)，低于周?chē)菈乃绤^(qū)。中央壞死區(qū)的ADC值高于周?chē)菈乃绤^(qū)，EADC值低于周?chē)菈乃绤^(qū)，差別有顯著性(b=100～1000

6、時(shí)，p=0.00079)。 第二章rAd/P53不同給藥途徑治療人類(lèi)結(jié)腸癌肝臟移植瘤模型基因轉(zhuǎn)錄效率的實(shí)驗(yàn)研究　　引言在腫瘤基因治療臨床前期研究的動(dòng)物實(shí)驗(yàn). 本研究目的是比較直接穿刺給藥與靜脈注射給藥，rAd/P53在腫瘤內(nèi)導(dǎo)入的效率，以期指導(dǎo)臨床治療晚期結(jié)腸癌時(shí)選用最方便、效果最佳、基岡制劑用量最少的導(dǎo)入途徑提供依據(jù)。 結(jié)論： rAd/P53經(jīng)靜脈注射還是直接瘤內(nèi)注射p53均可轉(zhuǎn)移到腫瘤細(xì)胞，但是即使

7、比直接瘤內(nèi)注射量大3.3～7.5倍，靜脈導(dǎo)入途徑p53導(dǎo)入效率明顯低于直接瘤內(nèi)注射，抗癌效果明顯差于直接瘤內(nèi)注射。無(wú)論是靜脈給藥還是直接腫瘤內(nèi)注射，rAd/p53對(duì)正常肝臟組織細(xì)胞無(wú)轉(zhuǎn)染，無(wú)損傷作用。 第三章rAd/P53與5-氟尿嘧啶或碘油配伍治療人類(lèi)結(jié)腸癌荷瘤裸鼠早期療效的檢測(cè)　　引言：p53抗癌機(jī)制之一就是增加腫瘤細(xì)胞對(duì)放療、化療的敏感性。許多實(shí)驗(yàn)與臨床觀察也表明，rAd/p53可增加化療藥物的抗癌作用。 在無(wú)創(chuàng)

8、的影像領(lǐng)域，MR的DWI、1H-MRS在判斷腫瘤細(xì)胞的生物學(xué)特性與代謝及壞死方面具有很大潛力，也成為許多抗癌治療臨床前期療效早期評(píng)價(jià)的熱門(mén)研究方法。目前未見(jiàn)有關(guān)利用上述成像技術(shù)評(píng)價(jià)p53抗癌效果的研究報(bào)道。 本研究目的： 運(yùn)用MR-DWI和1H-MRS研究上述配伍治療的早期改變，探索MR常用功能成像方法活體無(wú)創(chuàng)對(duì)rAd/p53早期抗癌療效評(píng)價(jià)的標(biāo)記物。 二、療效檢測(cè) (一)MR檢查于假治療或治療后24h、

9、48h、72h、120h、168h各組分別隨機(jī)取5個(gè)腫瘤量的荷瘤鼠，在麻醉狀態(tài)下用自制的外固定物固定，在Philips Gyrosean Intera Achieva1.5T Ivova Dual HP超導(dǎo)型MR成像儀上用膝關(guān)節(jié)8通道相控陣線(xiàn)圈(Syn-keen-8)行MR檢查。MR采集的序列同第一章。 (二)標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)研究MR檢查后處死荷瘤鼠，即切下腫瘤，檢測(cè)腫瘤的p53蛋白表達(dá)(westernblot)、細(xì)胞壞死(HE染色)

10、、凋亡(TUNEL)與細(xì)胞增殖狀況(ki-67染色)。 結(jié)果： 一、各實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組腫瘤大小對(duì)比各治療組與對(duì)照組在不同時(shí)間點(diǎn)腫瘤容積差別無(wú)顯著性。該結(jié)果可排除腫瘤大小不同所致的對(duì)腫瘤凋亡范圍的影響。 二、MR改變 (一)DWI 1.不同b值(100～1000 s/mm2)ADC、EADC的改變ADC值、EADC值在b=800 s/mm2時(shí)變異度最小。故取b值為800 s/mm2的DWI觀察各組腫瘤

11、的ADC值、EADC值改變。 2.b=800 s/mm2時(shí)，腫瘤ADC值與EADC值改變 3.EADC圖上顯示腫瘤壞死情況單純r(jià)Ad/P53治療后腫瘤在EADC圖上的壞死范圍(b=1000)較對(duì)照組增加，各時(shí)間點(diǎn)W統(tǒng)計(jì)量與p值依時(shí)間遞增分別為20，0.1508；17，0.0317；15，0.0079；16，0.0159；22，0.3095。 (二)1H-MRSWilcoxon檢驗(yàn)，24h：Cho/Cr面積比較對(duì)照

12、組減少，19=0.008；G1xβ～γ/Cr面積比較對(duì)照組減少，p=0.0130。48h：Lip峰高較對(duì)照組增加，p=0.0143，面積較對(duì)照組增加，p=0.0419。72h：G1xβ～γ/Cr面積比較對(duì)照組減少，p=0.0412。120h：G1xβ～γ/Cr面積比較對(duì)照組減少，p=0.0309；G1xα/Cr面積比較對(duì)照組減少，p=0.0027。168h：G1xβ～γ/Cr面積比較對(duì)照組減少，p=0.0014；G1xα/Cr面積比較對(duì)

13、照組減少，p=0.0121。 結(jié)論： rAd/p53單獨(dú)、聯(lián)合化療或與碘油乳液配伍治療人類(lèi)結(jié)腸癌SW480荷瘤裸鼠模型，腫瘤內(nèi)p53表達(dá)明顯增加，腫瘤壞死、凋亡范圍增加，有抗癌效果。5-FU可上調(diào)p53表達(dá)，碘油使p53表達(dá)峰值提前，表達(dá)量明顯增加，說(shuō)明兩者均有增加p53抗瘤性作用，而碘油有可能對(duì)腺病毒包裝的p53起到了航空母艦的運(yùn)載效果。 rAd/p53用藥1d-3d腫瘤細(xì)胞KI不同程度增加，可見(jiàn)增加腫瘤細(xì)胞的

14、增值活性是rAd/p53增加腫瘤細(xì)胞對(duì)放、化療的敏感性的機(jī)制之一，在用藥早期效果尤為明顯，5-FU與rAd/p53有協(xié)同作用。 ADC值和EADC值在治療后24h即可出現(xiàn)有統(tǒng)計(jì)意義的改變，可作為單純r(jià)Ad/p53、或聯(lián)合化療治療腫瘤早期療效評(píng)價(jià)的生物標(biāo)記物。但碘油可能因?yàn)閷?duì)腫瘤內(nèi)水分子擴(kuò)散的影響，ADC值、EADC值的早期改變較復(fù)雜，難于反應(yīng)腫瘤的治療效果。 1H-MRS可檢測(cè)多個(gè)代謝物，腫瘤治療早期Cho/Cr、G1x