定向遷移細(xì)胞前沿Rac局部化激活的調(diào)控機(jī)制——Paxillin-GIT1-PIX信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)RAC蛋白激活及細(xì)胞遷移.pdf

1、在細(xì)胞運動中激活Rac蛋白，其表現(xiàn)出很強(qiáng)的時間性和空間性，故在細(xì)胞前端產(chǎn)生扁平突起—片狀足。繼而使細(xì)胞產(chǎn)生運動牽拉胞體的過程。但對于正調(diào)控Rac蛋白局部化激活的原理到目前為止尚未定論。我們已知根據(jù)在細(xì)胞兩端及其后端當(dāng)整合素α4處于激活狀態(tài)時，則抑制Rac蛋白的活性。并根據(jù)信號分子的結(jié)構(gòu)及其功能提出了整合素正調(diào)控Rac蛋白活性的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，即當(dāng)α4胞內(nèi)區(qū)域磷酸化導(dǎo)致其不能與Paxillin結(jié)合時，Paxillin、GIT1，與PIX、P

2、AK形成信號分子復(fù)合物。由于PIX為Rac的轉(zhuǎn)換分子，PAK為Rac的效應(yīng)分子，構(gòu)成了Paxillin-GIT1-PIX-PAK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，在細(xì)胞前端Rac蛋白處于激活狀態(tài)時就會導(dǎo)致無細(xì)胞器的扇形突起—片狀足的形成，從而使細(xì)胞向前移動。
　　我們利用Western blotting技術(shù)，熒光雙定位技術(shù)，已經(jīng)驗證GIT1可與Paxillin相互作用、GIT1可與PIX相互作用、GIT1可與PAK相互作用，則確認(rèn)Paxillin-G

3、IT1-PIX-PAK信號分子復(fù)合物存在于細(xì)胞前端。我們設(shè)計、克隆了Paxillin的ShRNA，以降低細(xì)胞中Paxillin的表達(dá)。免疫熒光試驗表明，在轉(zhuǎn)染了shRNA中，Paxillin明顯受到抑制。Rac蛋白激活試驗表明，fibronectin刺激5min，Rac蛋白的激活程度最強(qiáng)。FRET定量檢測，驗證了該信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在Paxillin正?；蚴芤种魄闆r下Rac的激活。研究結(jié)果表明，在Paxillin表達(dá)受到抑制時，Rac蛋白激活