柑橘砧穗間可移動(dòng)mRNA分析及幾個(gè)FT改造載體功能分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、本論文為了探索韌皮部mRNA遠(yuǎn)距離傳遞機(jī)制,和FT mRNA移動(dòng)的可能性,構(gòu)建了35S.PtFT∶GFP,35S∶PtFT GFP tRNA22和35S∷PtFT∶tRNA22超表達(dá)載體,以野生型番茄分別與超表達(dá)PtFT GFP,PtFT GFP tRNA22和PtFT tRNA22轉(zhuǎn)基因番茄進(jìn)行嫁接,以GFP熒光示蹤研究FT的傳導(dǎo)能力、方向、途徑和分配規(guī)律;通過在PtFT和PtFT GFP基因序列后面加tRNA22,來研究改造的FT

2、mRNA在促進(jìn)轉(zhuǎn)基因植株成花能力上有增強(qiáng)。主要研究結(jié)果如下:
  (1)對(duì)實(shí)驗(yàn)室前期克里曼丁/早實(shí)枳種間嫁接組合轉(zhuǎn)錄組測(cè)序數(shù)據(jù)分析,篩查到1073個(gè)可移動(dòng)的mRNA,從中挑取了61個(gè)基因進(jìn)一步驗(yàn)證。根據(jù)候選基因目標(biāo)SNP附近PCR擴(kuò)增產(chǎn)物測(cè)序分析,有15個(gè)mRNA分子移動(dòng)獲得證實(shí),其中8個(gè)mRNA由接穗向砧木移動(dòng),有5個(gè)mRNA由砧木向接穗移動(dòng),有2個(gè)mRNA發(fā)生雙向移動(dòng)。
  (2)通過利用PlaMoM(Plant Mob

3、ile Macromolecules)TLS finder在線分析工具(http://www.systembioinfo.org/plamom/),對(duì)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)的mRNA的TLS類似結(jié)構(gòu)進(jìn)行了掃描,發(fā)現(xiàn)向上移動(dòng)和向下移動(dòng)的mRNA中分別有8.6%和14.9%具有發(fā)夾結(jié)構(gòu),說明含有TLS類似結(jié)構(gòu)的基因可能有利于mRNA移動(dòng)或移動(dòng)過程的穩(wěn)定性。
  (3)構(gòu)建了3SS.∶PtFTGFP、35S∷PtFT.GFP∶tRNA22和35S∷P

4、tFT tRNA22超表達(dá)載體,分別轉(zhuǎn)化番茄,獲得了超表達(dá)陽性株系,從DNA水平和RNA水平進(jìn)行陽性檢測(cè),結(jié)果表明外源基因已經(jīng)成功整合到番茄的基因組中。
  (4)對(duì)轉(zhuǎn)基因株系進(jìn)行表型觀察,結(jié)果發(fā)現(xiàn)與野生型番茄相比,PtFT∶GFP和PtFT∶tRNA22超表達(dá)番茄都表現(xiàn)出早花現(xiàn)象,而PtFT∶GFP∶tRNA22超表達(dá)番茄沒有表現(xiàn)出明顯的早花現(xiàn)象。這表明PtFT∶GFP和PtFT∶tRNA22基因的超表達(dá)均可以促進(jìn)番茄的早花。<

5、br>  (5)將野生型番茄分別嫁接到超表達(dá)PtFT∶GFP∶tRNA22和PtFT∶tRNA22轉(zhuǎn)基因番茄上,利用熒光顯微鏡研究PtFT∶GFP∶tRNA22在蛋白質(zhì)水平的移動(dòng),結(jié)果發(fā)現(xiàn)在野生型接穗中嫁接口上1cm處檢測(cè)到熒光信號(hào),在嫁接口上4cm處熒光信號(hào)消失,說明PtFT∶GFP∶tRNA22基因可以在蛋白質(zhì)水平發(fā)生移動(dòng)。但在接穗部位未檢測(cè)到外源PtFT mRNA,表明外源PtFT∶GFP∶tRNA22和PtFT∶tRNA2的mR

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