蛹蟲(chóng)草活性組分的提取及其抗腫瘤效果的研究.pdf

1、蛹蟲(chóng)草是寄生于昆蟲(chóng)的真菌。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)蛹蟲(chóng)草含有蟲(chóng)草素、多糖和甾醇等豐富的生理活性物質(zhì)，具有很高的藥用價(jià)值和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。研究顯示其在腫瘤治療及輔助治療方面具有巨大的潛力。
　　 本研究共分為三個(gè)部分:蟲(chóng)草素、腺苷、多糖的含量分析以及蟲(chóng)草素的優(yōu)化提取、體內(nèi)體外抗腫瘤效果分析和抗腫瘤活性物質(zhì)的分離純化。研究從這三個(gè)部分切入，從藥物開(kāi)發(fā)的角度，較為系統(tǒng)的分析了蛹蟲(chóng)草水溶性活性組分和水提沉淀物在抗腫瘤方面的作用效果。
　　 研究

2、首先對(duì)蛹蟲(chóng)草中的活性物質(zhì)——蟲(chóng)草素、腺苷和多糖的含量進(jìn)行了測(cè)定，并比較了人工蛹蟲(chóng)草與天然冬蟲(chóng)夏草中蟲(chóng)草素和腺苷的含量。研究以水作為溶劑，采用常溫超聲法提取，應(yīng)用高效液相色譜儀對(duì)蟲(chóng)草素和腺苷的含量進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蛹蟲(chóng)草中蟲(chóng)草素和腺苷的含量分別為7.03mg/g和0.59mg/g，而天然冬蟲(chóng)夏草在此種條件下未檢測(cè)出蟲(chóng)草素和腺苷。研究采用苯酚.硫酸法測(cè)定人工蛹蟲(chóng)草中多糖的含量，確定其含量為3.10％。
　　 為了提高蛹蟲(chóng)草中最主要的

3、活性物質(zhì)之一——蟲(chóng)草素的提取率，采用半仿生提取法對(duì)蛹蟲(chóng)草中的蟲(chóng)草素進(jìn)行了提取，并通過(guò)均勻設(shè)計(jì)法對(duì)提取溶劑pH值及提取時(shí)間兩個(gè)因素進(jìn)行了優(yōu)化。結(jié)果表明:三次連續(xù)提取用水pH值分別為2.00，7.00，10.00，超聲波提取時(shí)間分別為45min，27min和27min，總時(shí)間為99min時(shí)，此條件下每g生藥材中可提取到7.417mg的蟲(chóng)草素。此為蟲(chóng)草素的提取及其中試生產(chǎn)提供了理論依據(jù)。
　　 其次，為了探討蛹蟲(chóng)草水提取物的抗腫瘤作用

4、，本研究從體外和體內(nèi)兩個(gè)角度對(duì)其抗腫瘤效果進(jìn)行了研究評(píng)估。體外實(shí)驗(yàn)以正常細(xì)胞人胚腎細(xì)胞HEK293，正常細(xì)胞人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞HuVEC，人乳腺癌細(xì)胞MCF-7，人乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231，人結(jié)腸癌細(xì)胞LoVo，人肝胚癌細(xì)胞HLF-K10，人肝胚癌細(xì)胞HLF-CPN(1)，人肝胚癌細(xì)胞HLF-Kollis，人肺腺癌細(xì)胞A549以及小鼠lewis肺癌細(xì)胞為研究對(duì)象，采用MTT法分析了蛹蟲(chóng)草水提取物對(duì)正常細(xì)胞及癌細(xì)胞生長(zhǎng)的增殖抑制作

5、用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)蛹蟲(chóng)草水提取物對(duì)所有細(xì)胞的生長(zhǎng)均具有一定的抑制作，且抑制作用呈時(shí)間——?jiǎng)┝恳蕾?lài)效應(yīng)。研究結(jié)果還發(fā)現(xiàn)，蛹蟲(chóng)草水提取物對(duì)人源細(xì)胞的細(xì)胞毒作用較弱，而對(duì)小鼠lewis肺癌細(xì)胞具有很強(qiáng)的生長(zhǎng)抑制作用。
　　 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)以小鼠艾氏腹水瘤(EAC)，小鼠肝癌腹水HepA為研究對(duì)象，考察了蛹蟲(chóng)草粉，蛹蟲(chóng)草水提取物，蛹蟲(chóng)草水提沉淀物的體內(nèi)抗腫瘤作用，結(jié)果表明，以環(huán)磷酰胺為陽(yáng)性對(duì)照，蛹蟲(chóng)草水提取物和蛹蟲(chóng)草水提沉淀物對(duì)小鼠艾氏腹水癌(EA

6、C)均顯示出抑制活性，尤其是蛹蟲(chóng)草水提沉淀物組對(duì)小鼠艾氏腹水癌(EAC)的抑制率接近30％，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 通過(guò)小鼠體內(nèi)急性毒實(shí)驗(yàn)，分析了不同方法提取得到的蛹蟲(chóng)草水提取物及水提沉淀物的體內(nèi)毒性，結(jié)果表明蛹蟲(chóng)草水提物及水提沉淀物均屬于實(shí)際無(wú)毒類(lèi)，表明人工蛹蟲(chóng)草及其水溶性和水提沉淀物分適合作為新的藥用資源，有進(jìn)一步開(kāi)發(fā)和利用的價(jià)值。
　　 最后，以提取物質(zhì)對(duì)小鼠lewis肺癌細(xì)胞的毒性為指導(dǎo)，從蛹蟲(chóng)草水溶性組分中分離