多聚賴氨酸(PLL)修飾納米三氧化二鐵轉(zhuǎn)運(yùn)siRNA的研究.pdf

1、目的:本項(xiàng)研究通過檢測納米三氧化二鐵對神經(jīng)細(xì)胞的毒性以及攜帶siRNA后對靶基因的沉默效果來驗(yàn)證納米三氧化二鐵能否成為siRNA的有效載體。
　　 方法:1.取孕15天左右SD大鼠的胎鼠為材料體外混合培養(yǎng)神經(jīng)細(xì)胞，用不同濃度的Fe2O3-NP培養(yǎng)液對神經(jīng)細(xì)胞作用不同時(shí)間;2.用光學(xué)顯微鏡觀察和普魯士藍(lán)實(shí)驗(yàn)證實(shí)納米三氧化二鐵是否可以通過神經(jīng)細(xì)胞的細(xì)胞膜;3.利用光學(xué)顯微鏡對納米三氧化二鐵作用后的神經(jīng)細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察，對比各組

2、細(xì)胞的形態(tài)變化;利用LDH實(shí)驗(yàn)和MTT實(shí)驗(yàn)檢測神經(jīng)細(xì)胞的增殖與凋亡情況以反映納米三氧化二鐵對神經(jīng)細(xì)胞的毒性;4.用多聚賴氨酸修飾后的納米三氧化二鐵轉(zhuǎn)運(yùn)siRNA到靶細(xì)胞進(jìn)行靶基因沉默;5.利用WESTERNblott和免疫熒光技術(shù)檢測靶基因的沉默效率。
　　 結(jié)果:1）光學(xué)顯微鏡下可以看到納米三氧化二鐵進(jìn)入神經(jīng)細(xì)胞并出現(xiàn)團(tuán)聚現(xiàn)象
　　 2)普魯士藍(lán)染色后神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)被染成藍(lán)色。
　　 3)光學(xué)顯微鏡下可以看到納米三

3、氧化二鐵進(jìn)入神經(jīng)細(xì)胞后神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)無明顯改變;
　　 4)MTT實(shí)驗(yàn)和LDH實(shí)驗(yàn)證實(shí)實(shí)驗(yàn)條件下的納米三氧化二鐵對體外培養(yǎng)的神經(jīng)細(xì)胞的增殖和凋亡無明顯影響;
　　 5)熒光顯微鏡下觀察PLL-Fe2O3/SiO2-NP可以將siRNA順利轉(zhuǎn)運(yùn)到靶細(xì)胞內(nèi)
　　 6)WESTERN和免疫熒光檢測顯示PLL-Fe2O3/SiO2-NP轉(zhuǎn)運(yùn)siRNA進(jìn)行靶基因沉默后靶蛋白明顯減少。
　　 結(jié)論:1.納米三氧化二鐵可