SPATA5L1基因在KB細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的生物學(xué)意義.pdf

1、目的：研究轉(zhuǎn)染 SPATA5L1基因后人口腔上皮癌 KB細(xì)胞株pEX-1-SPATA5L1-KB，以了解高表達(dá)SPATA5L1蛋白在上皮細(xì)胞-間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）過程中的生物學(xué)作用。
　　方法：免疫熒光法激光共聚焦顯微鏡觀察SPATA5L1在KB細(xì)胞中的定位，同時(shí)通過Western blot方法分別檢測(cè)KB細(xì)胞的核蛋白和漿蛋白，確定SPATA5L1在KB細(xì)胞中的表達(dá)和定位。Western blot方法檢測(cè)穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后的pEX-1-SP

2、ATA5L1-KB中SPATA5L1蛋白表達(dá)量。采用Transwell細(xì)胞侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SPATA5L1對(duì)KB細(xì)胞侵襲能力的改變，掃描電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)的變化尤其是偽足的變化。利用CCK-8法及18F-FLT摻入法測(cè)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的增殖能力，并與空轉(zhuǎn)染細(xì)胞對(duì)照。Western Blot法檢測(cè)各轉(zhuǎn)染細(xì)胞和對(duì)照細(xì)胞中 E-cadherin、N-cadherin及Vimentin等EMT相關(guān)標(biāo)志蛋白的表達(dá)水平，檢測(cè)與Wnt信號(hào)通路有關(guān)的幾個(gè)蛋白表達(dá)水

3、平。
　　結(jié)果：SPATA5L1在KB細(xì)胞中主要定位在細(xì)胞質(zhì)中，細(xì)胞核中無表達(dá)。相比于空轉(zhuǎn)染細(xì)胞，穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞株pEX-1-SPATA5L1-KB中目的基因SPATA5L1具有高表達(dá)，其侵襲能力明顯增加，且細(xì)胞形態(tài)由正多邊形變?yōu)榧忓N體形，并且細(xì)胞表面絲狀偽足明顯增長(zhǎng)且數(shù)量增多，其細(xì)胞增殖能力增強(qiáng)。SPATA5L1在KB細(xì)胞中過表達(dá)能夠抑制上皮細(xì)胞標(biāo)志物 E-cadherin的表達(dá)，并促進(jìn)間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物N-cadherin和Vime