HCMV感染在宮頸癌Siha細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中的作用及意義.pdf

1、目的：
　　1.將人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus，HCMV)協(xié)同轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(TGF-β1)作用于宮頸癌細(xì)胞Siha，建立體外宮頸癌細(xì)胞發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的模型。
　　2.檢測(cè)上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化相關(guān)蛋白E-鈣黏蛋白、波形蛋白和基質(zhì)金屬蛋白-2（MMP-2）及其基因的表達(dá)和轉(zhuǎn)錄水平的變化情況，同時(shí)檢測(cè)細(xì)胞活性，從而探討HCMV感染對(duì)宮頸癌發(fā)生上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化的作用和分子生物學(xué)機(jī)制。
　　方法與材

2、料：
　　1.培養(yǎng)宮頸癌Siha細(xì)胞，擴(kuò)增HCMV病毒并測(cè)定病毒滴度。
　　2.將HCMV AD169(MOI=5)和5ng/ml TGF-β1協(xié)同作用的子宮頸癌Siha細(xì)胞設(shè)為實(shí)驗(yàn)組，僅僅TGF-β1作用的為對(duì)照組，通過倒置顯微鏡觀察兩組Siha細(xì)胞24h、48h、72h后的形態(tài)學(xué)變化。
　　3.在HCMV和TGF-β1協(xié)同作用Siha細(xì)胞0 h、24 h、48 h、72 h后，通過RT-PCR檢測(cè)和 Western

3、-blot檢測(cè)兩組細(xì)胞上皮細(xì)胞標(biāo)記物 E-鈣黏蛋白、間質(zhì)細(xì)胞標(biāo)記物波形蛋白以及上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化介導(dǎo)分子MMP-2轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平的變化。
　　4. CCK-8法檢測(cè)宮頸癌Siha細(xì)胞的增殖率及活性情況。
　　結(jié)果：
　　1. HCMV和TGF-β1協(xié)同作用宮頸癌Siha細(xì)胞后，48h發(fā)生了細(xì)胞形態(tài)學(xué)的變化；對(duì)照組的宮頸癌Siha細(xì)胞在72h發(fā)生細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化。
　　2. RT-PCR結(jié)果顯示，宮頸癌Siha細(xì)胞在HC

4、MV和TGF-β1協(xié)同作用24 h、48h、72h時(shí)，E-鈣黏蛋白的轉(zhuǎn)錄水平與對(duì)照組相比明顯下調(diào)(P<0.01)，宮頸癌Siha細(xì)胞在HCMV和TGF-β1協(xié)同作用24 h時(shí)，波形蛋白開始表達(dá)而對(duì)照組48 h表達(dá)，且在48 h和72 h，波形蛋白的轉(zhuǎn)錄水平與對(duì)照組相比均明顯上調(diào)(P<0.01)。
　　5. Western blot結(jié)果顯示，宮頸癌Siha細(xì)胞在HCMV和TGF-β1協(xié)同作用24 h時(shí)，E-鈣黏蛋白的表達(dá)水平與對(duì)照組

5、相比明顯下調(diào)(P<0.01)；宮頸癌 Siha細(xì)胞在HCMV和TGF-β1協(xié)同作用24 h時(shí)，波形蛋白及MMP-2開始表達(dá)而對(duì)照組48 h表達(dá)，且在48 h和72 h，表達(dá)水平與對(duì)照組相比均明顯上調(diào)(P<0.01)。
　　3. CCK-8結(jié)果顯示，HCMV和TGF-β1協(xié)同作用宮頸癌Siha細(xì)胞24 h、48 h、72h后，與對(duì)照組相比實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞的增殖活性逐漸增高(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1. HCMV感染可