鴉膽子油乳對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞的抑制作用及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、宮頸癌是女性最常見的生殖道惡性腫瘤，占女性生殖系統(tǒng)惡性腫瘤的半數(shù)以上，嚴(yán)重威脅女性的健康。我國宮頸癌的發(fā)病率逐年上升，且呈年輕化趨勢。人乳頭瘤病毒(Human Papilloma virus，HPV)感染是其重要至病原因之一。鴉膽子油乳(Brucea javanica oil cmulsion，BJOE)為苦木科植物鴉膽子Brucea javanica(L.)Merr．的干燥成熟果實(shí)的提取物，能夠穿透血腦屏障，降低顱內(nèi)壓。同時(shí)還可以用于

2、治療HPV引起的多種疣。研究表明，鴉膽子油乳的主要活性成分——油酸和亞油酸具有很強(qiáng)的抗癌活性。該藥與放療和/或化療聯(lián)合應(yīng)用有一定的防止白細(xì)胞和血小板降低的作用，還可促進(jìn)骨髓干細(xì)胞形成，調(diào)節(jié)免疫力，從而提高患者的生存質(zhì)量。臨床上已被應(yīng)用于肺癌、肝癌、轉(zhuǎn)移性腦瘤等多種惡性腫瘤的輔助治療。但是目前尚未見用該藥治療宮頸癌的臨床報(bào)道。本研究用鴉膽子油乳體外實(shí)驗(yàn)研究觀察該藥對(duì)SiHa細(xì)胞的抑制作用極其作用機(jī)制。研究結(jié)果可為鴉膽子油乳用于臨床宮頸癌的

3、輔助治療提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和依據(jù)。 方法: 一、細(xì)胞培養(yǎng) 常規(guī)方法培養(yǎng)SiHa細(xì)胞。 二、細(xì)胞抑制率的檢測 將SiHa細(xì)胞轉(zhuǎn)移到96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，加入不同濃度藥物，繼續(xù)培養(yǎng)24h、48h和72h，每孔加入MTT和二甲基亞砜(DMSO)，常規(guī)方法用酶標(biāo)儀在550nm處測吸光度(OD值)。 三、凋亡細(xì)胞形態(tài)學(xué)檢測 不同濃度鴉膽子油乳作用細(xì)胞48h后，分別收集所有細(xì)胞，常規(guī)方法制作電鏡標(biāo)本，

4、透射電鏡觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)。 四、凋亡細(xì)胞DNA梯帶的觀察 細(xì)胞經(jīng)不同濃度鴉膽子油乳藥物作用48h后，分別收集所有細(xì)胞，常規(guī)方法提取DNA，瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察拍照。 五、細(xì)胞凋亡率的檢測 細(xì)胞加入鴉膽子油乳，繼續(xù)孵育48h，收集不同藥物濃度處理的SiHa細(xì)胞，流式細(xì)胞儀檢測凋亡率。 結(jié)果: 一、藥物對(duì)細(xì)胞抑制率的檢測結(jié)果 不同濃度的鴉膽子油乳作用24h、48h、72h后，對(duì)

5、宮頸癌細(xì)胞系SiHa細(xì)胞有很強(qiáng)的抑制作用。細(xì)胞抑制率與時(shí)間和藥物濃度有關(guān)。隨著作用時(shí)間的延長和藥物濃度的加大，細(xì)胞毒性作用逐漸增強(qiáng)，存在時(shí)間和濃度依賴性。 二、細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變 透射電鏡觀察凋亡細(xì)胞形態(tài)，對(duì)照組細(xì)胞絨毛清晰，細(xì)胞膜、核膜均完整；不同濃度藥物作用48h后，可以看到早期細(xì)胞核內(nèi)染色質(zhì)凝聚，邊集于核膜及晚期核內(nèi)出現(xiàn)凋亡小體。 三、瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果觀察 20μg/ml藥物組瓊脂糖凝膠電泳上顯示明顯

6、的凋亡梯帶，而對(duì)照組及10μg/ml藥物作用組則沒有出現(xiàn)片段化。 四、細(xì)胞凋亡率的檢測結(jié)果 在不同濃度鴉膽子油乳作用48h后，流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。看到總體凋亡率逐漸生高，早期與晚期共同凋亡率與空白對(duì)照組比較差異具有顯著性。 討論 本文首次用鴉膽子油乳體外實(shí)驗(yàn)研究觀察該藥對(duì)宮頸癌SiHa細(xì)胞的抑制作用。結(jié)果表明，鴉膽子油乳在體外能夠明顯抑制宮頸癌SiHa細(xì)胞的增殖，隨藥物濃度的增加和作用時(shí)間的延長其抑

7、制作用逐漸增強(qiáng)。 細(xì)胞的凋亡與腫瘤的發(fā)生及其相關(guān)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡是很多化療藥物的作用機(jī)制之一。本研究表明經(jīng)鴉膽子油乳作用48h后電子顯微鏡觀察到凋亡小體。DNA梯帶法檢測到凋亡時(shí)DNA降解形成的梯帶。從形態(tài)學(xué)和生物化學(xué)及分子生物學(xué)角度證實(shí)了鴉膽子油乳對(duì)SiHa細(xì)胞有誘導(dǎo)凋亡的作用。 流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率，看到總體凋亡率逐漸生高，早期與晚期共同凋亡率與空白對(duì)照組比較差異具有顯著性。進(jìn)一步說明鴉膽子油乳對(duì)SiHa細(xì)胞的