胸膜肺炎放線桿菌potD2基因缺失株的構(gòu)建及其生物學(xué)特性研究.pdf

1、論文獨創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學(xué)位論文是我個人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行研究工作所取得的成果。盡我所知，除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，學(xué)位論文中不包含其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得四川農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機構(gòu)的學(xué)位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說明并表示了謝意。研冉生虢森嗣||易秒／占年f月／7日一r_lY／7關(guān)于論文使用授權(quán)的聲明本人完全了解四川農(nóng)業(yè)大學(xué)有

2、關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。同意四川農(nóng)業(yè)大學(xué)可以用不同方式在不同媒體上發(fā)表、傳播學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容。略論文不保密?？诒菊撐谋Ｃ?，在一年解密后適用本授權(quán)。(請在以上口內(nèi)劃“√”)研究生簽名：題雨導(dǎo)師簽名伽％如比年6月J『砂日年毛月1z日2、MSApotD2生物學(xué)特性及其小鼠毒力試驗研究檢測MS△

3、potD2及互補株的穩(wěn)定性表明MSApotD2和C△potD2傳10代培養(yǎng)，每代均能正常生長繁殖，且potD2基因敲除后無回復(fù)突變，互補質(zhì)粒也穩(wěn)定存在。生長特性研究發(fā)現(xiàn)，MSApotD2缺失株在對數(shù)生長前期低于親本株和互補株，然而幾乎同時到達(dá)同一穩(wěn)定平臺期，這表明potD2基因的敲除僅對細(xì)菌生長活性無明顯影響。菌液接種于含5％新鮮山羊血的TSA培養(yǎng)基，觀察溶血情況表明三株菌株都具有完全溶血的活性，而MSApotD2溶血直徑略低于MS07

4、21及CApotD2。分別使用96孔培養(yǎng)法和試管培養(yǎng)法檢測生物被膜的生成，結(jié)果發(fā)現(xiàn)三株菌株都不能形成生物膜，推測可能有細(xì)菌血清型有關(guān)。取對數(shù)生長期菌液MS0721、MSApotD2及C△potD2稀釋后于含O3MKCl和NaCl的TSA平板中過夜培養(yǎng)，通過存活率比較來評估potD2基因?qū)?xì)菌耐高滲透壓的影響，結(jié)果發(fā)現(xiàn)MSApotD2在高滲的環(huán)境中存活率低于親本株和突變回復(fù)株，差異明顯。此外研究菌株的耐氧化和耐熱特性發(fā)現(xiàn)，經(jīng)08mM的H2

5、02處理后，MSApotD2存活率不到10％，遠(yuǎn)低于親本株MS0721和CApotD2MSApotD2熱激后的存活率也明顯低于MS0721和CApotD2，以上說明potD2基因缺失后影響了APP的環(huán)境壓力耐受能力。小鼠攻毒實驗測各菌株半數(shù)致死量LD50，結(jié)果表明MSApotD2缺失株毒力略低于親本株和互補株，但是差異不顯著，說明potD2基因缺失對APP毒力的影響很小。關(guān)鍵詞：胸膜肺炎放線桿菌；多胺轉(zhuǎn)運系統(tǒng)；基因敲除；生物特性；壓力耐