GLP-1類似物利拉魯肽對高脂誘導(dǎo)肥胖小鼠的CD4+T細(xì)胞亞群失衡的作用.pdf

1、肥胖發(fā)病率逐年增高，已成為一種危害全人類健康的代謝性疾病。根據(jù)以往研究，肥胖的是一種由多種因素引起的慢性代謝性疾病，是代謝綜合征的重要因素之一，系統(tǒng)性、慢性、低度炎癥已成為肥胖發(fā)病的重要特征，同時(shí)已被證實(shí)是肥胖及相關(guān)代謝性并發(fā)癥發(fā)病的核心環(huán)節(jié)。肥胖基本的表現(xiàn)是系統(tǒng)性的白細(xì)胞免疫學(xué)組分的改變，其中CD+4 T細(xì)胞功能性極化已被證實(shí)較巨噬細(xì)胞更早的參與了慢性炎癥的發(fā)生發(fā)展，CD+4 T細(xì)胞亞群中抗炎性細(xì)胞和促炎性細(xì)胞的比例過度失衡是慢性炎癥

2、的重要扳機(jī)點(diǎn)。
　　胰高血糖素樣肽-1(Glucagon-like peptide1,GLP-1)為一類內(nèi)源性的腸促胰島素，刺激胰腺的β細(xì)胞分泌胰島素并依賴于葡萄糖濃度降糖，通過與特定的胰高血糖素樣肽-1受體(glucagon like peptide-1 receptor，GLP-1R)結(jié)合后產(chǎn)生效應(yīng)。已有研究證實(shí)GLP-1可以減少內(nèi)臟脂肪，參與脂肪細(xì)胞局部抗炎與局部免疫調(diào)控過程，包括Th1細(xì)胞亞群及比例的調(diào)節(jié)，但缺乏GLP-1

3、對系統(tǒng)性的免疫調(diào)控的研究，亦即以CD4+T細(xì)胞亞群作為一個(gè)整體作為研究對象。GLP-1對高脂所致肥胖的外周循環(huán)CD4+T細(xì)胞的作用有待進(jìn)一步研究。
　　目的：
　　通過高脂飼料構(gòu)建肥胖小鼠模型，采用GLP-1類似物利拉魯肽干預(yù)，檢測不同組小鼠外周血的CD4+T細(xì)胞亞群數(shù)目及比例、相關(guān)促炎性細(xì)胞因子水平，并體外培養(yǎng)Treg細(xì)胞檢測細(xì)胞功能變化，闡明GLP-1在T細(xì)胞亞群失衡中發(fā)揮的作用，為GLP-1治療肥胖及相關(guān)代謝性并發(fā)癥的

4、發(fā)生發(fā)展提供新的研究途徑。
　　方法：
　　1.高脂肪飼料構(gòu)建肥胖小鼠模型
　　4周齡C57BL/6小鼠分為高脂喂養(yǎng)組(n=60)和正常對照組(n=20)，分別給予高脂飼料和普通飼料喂養(yǎng)，建模喂養(yǎng)時(shí)長16周，每周定期監(jiān)測小鼠體質(zhì)量，繪制體重的趨勢圖。
　　2.GLP-1類似物利拉魯肽干預(yù)成模的肥胖小鼠
　　造模成功的肥胖小鼠隨機(jī)分組:GLP-1類似物利拉魯肽干預(yù)組、單純飲食干預(yù)組、繼續(xù)高脂喂養(yǎng)組，其中利拉魯

5、肽組腹腔注射干預(yù)12周，飲食干預(yù)組、繼續(xù)高脂組和正常對照組給予等體積生理鹽水腹腔注射。
　　3.GLP-1類似物利拉魯肽對小鼠外周血CD4+T細(xì)胞亞群的影響
　　采用流式細(xì)胞術(shù)多染色法標(biāo)記T淋巴細(xì)胞的表面CD4分子以及相關(guān)的表面抗原因子，區(qū)分Th1/Th2/Treg/Th17細(xì)胞，圈出各亞群比例和數(shù)目。
　　4.GLP-1類似物利拉魯肽對肥胖小鼠外周血相關(guān)炎性細(xì)胞因子的影響
　　酶聯(lián)免疫吸附法檢測小鼠外周血IFN

6、-γ、IL-22、IL-17A水平，通過相關(guān)細(xì)胞因子的濃度變化評(píng)價(jià)利拉魯肽對免疫細(xì)胞的調(diào)節(jié)。
　　5.GLP-1類似物利拉魯肽對肥胖小鼠相關(guān)代謝的影響
　　在利拉魯肽干預(yù)肥胖小鼠后，分別測定小鼠外周血清血脂（甘油三酯、總膽固醇）水平、空腹血糖，行ITT、IPGTT實(shí)驗(yàn)，探討GLP-1對肥胖小鼠代謝的影響。
　　6.體外細(xì)胞培養(yǎng)檢測GLP-1對Treg細(xì)胞作用
　　利用磁珠分選小鼠脾臟Treg細(xì)胞并擴(kuò)增，采取體外混

7、合淋巴細(xì)胞反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，檢測細(xì)胞的體外分裂增殖，探究GLP-1類似物利拉魯肽對Treg細(xì)胞與T反應(yīng)細(xì)胞的功能狀態(tài)的變化。
　　結(jié)果：
　　1.成模的肥胖小鼠存在CD4+T細(xì)胞亞群的改變
　　成模肥胖小鼠的外周血CD4+T細(xì)胞亞群，其中促炎性CD4+T細(xì)胞亞群占總外周血CD4+T細(xì)胞的比例上調(diào)，以Th1與Th17細(xì)胞亞群比例上升最為顯著;抗炎性CD4+T細(xì)胞亞群占總外周血CD4+T細(xì)胞的比例下調(diào)，以Th2與Treg細(xì)胞亞群比

8、例下降最為顯著。
　　2.GLP-1類似物利拉魯肽可降低促炎性CD4+T細(xì)胞亞群，上調(diào)抗炎性CD4+T細(xì)胞亞群
　　利拉魯肽干預(yù)后小鼠外周血CD4+T細(xì)胞亞群顯著變化，促炎性CD4+T細(xì)胞亞群（Th1、Th17細(xì)胞為主）占總CD4+T細(xì)胞比例有不同程度的下降，抗炎性CD4+T細(xì)胞亞群（Th2、Treg細(xì)胞為主）占總CD4+T細(xì)胞比例有不同程度的上升。
　　3.GLP-1類似物利拉魯肽可降低促炎Th細(xì)胞亞群代表性細(xì)胞因子

9、水平
　　利拉魯肽干預(yù)后小鼠外周血血清各細(xì)胞亞群對應(yīng)的炎性細(xì)胞因子存在不同水平的下調(diào)，其中IFN-γ、IL-22、IL-17下降與各自對應(yīng)的細(xì)胞亞群(Th1、Th17細(xì)胞)之間表現(xiàn)出正相關(guān)性。
　　4.GLP-1類似物利拉魯肽改善肥胖小鼠脾臟Treg細(xì)胞功能
　　通過經(jīng)典體外混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)實(shí)驗(yàn)，利拉魯肽干預(yù)后的小鼠脾臟Treg細(xì)胞對反應(yīng)性T細(xì)胞增殖的抑制能力增強(qiáng)，小鼠脾臟Treg細(xì)胞功能狀態(tài)上調(diào)。
　　5.GL

10、P-1類似物利拉魯肽改善肥胖小鼠的代謝失調(diào)
　　較飲食干預(yù)組、高脂喂養(yǎng)組，利拉魯肽干預(yù)后小鼠的胰島素敏感性和葡萄糖耐性都有明顯好轉(zhuǎn)，在多個(gè)時(shí)間點(diǎn)上均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。利拉魯肽組的甘油三酯水平與飲食干預(yù)組和高脂喂養(yǎng)組均出現(xiàn)不同程度差異。
　　結(jié)論：
　　一、高脂肪誘導(dǎo)成肥胖小鼠后外周血促炎性CD4+T細(xì)胞亞群比例上調(diào)及功能亢進(jìn)，抗炎性CD4+T細(xì)胞亞群比例的下調(diào)及功能下降，GLP-1類似物利拉魯肽干預(yù)可降低促炎性CD4+T