電針對(duì)帕金森病大鼠抗腦組織氧化損傷及神經(jīng)保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：帕金森病(PD)是常見(jiàn)的中樞神經(jīng)系統(tǒng)慢性退行性疾病，嚴(yán)重威脅著中老年人的身體健康和生活質(zhì)量。本研究采用頸、背部皮下注射魚(yú)藤酮溶液制備PD大鼠模型，擬用補(bǔ)腎養(yǎng)肝填髓、熄風(fēng)通絡(luò)止顫法，觀察電針百會(huì)、三陰交、太沖穴對(duì)實(shí)驗(yàn)性PD大鼠行為學(xué)、中腦黑質(zhì)超氧化物歧化酶(SOD)活力和谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽過(guò)氧化酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)含量的影響，探討其抗腦組織氧化損傷的作用機(jī)制；觀察其對(duì)中腦黑質(zhì)酪氨酸羥化酶(TH)及多巴胺(D

2、A)能神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響，探討其對(duì)PD大鼠DA能神經(jīng)元的保護(hù)作用，進(jìn)一步研究針灸治療PD的作用機(jī)制。
　　方法：
　　78只Wistar大鼠均自然光照，自由飲水進(jìn)食，正常飼養(yǎng)1周后，隨機(jī)選取58只作為模型組大鼠，采用頸、背部皮下注射魚(yú)藤酮溶液0.8mg/kg·d，(溶劑為二甲基亞砜，濃度為2mg/ml)28d制備PD大鼠模型；其余20只作為正常組注射等體積的溶劑。造模結(jié)束后，通過(guò)網(wǎng)格實(shí)驗(yàn)、懸掛實(shí)驗(yàn)和開(kāi)闊實(shí)驗(yàn)對(duì)比模型組和正常組

3、大鼠的行為學(xué)變化，模型組和正常組各隨機(jī)選取10只剖殺，觀察組織形態(tài)和神經(jīng)生化變化，以判定造模成功與否。造模成功后將模型組大鼠隨機(jī)分為模型組、西藥組和電針組。
　　動(dòng)物模型建立后次日開(kāi)始治療，西藥組大鼠每日給予美多巴混懸液灌胃1.67mg/kg·d(生理鹽水配制的濃度為25mg/ml的美多巴混懸液)；電針組大鼠每日按順序給予治療，將大鼠固定在自制束鼠器上，參照全國(guó)針灸學(xué)會(huì)實(shí)驗(yàn)針灸研究會(huì)制定的《實(shí)驗(yàn)動(dòng)物針灸穴位圖譜》，選百會(huì)、三陰交、

4、太沖穴，用ψ0.30mm×13mm毫針刺入，接韓氏電針儀，采用疏密波，頻率疏波2Hz、密波80Hz，強(qiáng)度2.0mA，10min/次·d，西藥組和電針組均7d/療程，共治療2個(gè)療程，療程間休息1d；除西藥組外，其余各組均灌服等體積的生理鹽水；除電針組外，其余各組均采用同一體位固定10min/次·d。治療均由同一操作者操作。
　　治療結(jié)束后，觀察大鼠包括懸掛實(shí)驗(yàn)、網(wǎng)格實(shí)驗(yàn)及開(kāi)闊實(shí)驗(yàn)在內(nèi)的行為學(xué)變化后，將大鼠脫臼處死取腦，右腦取中腦黑質(zhì)

5、行黃嘌呤氧化酶法測(cè)定腦組織SOD活力，比色定量分析法測(cè)定GSH、GSH-Px含量，硫代巴比妥酸比色分析法測(cè)定MDA含量。左腦行中腦黑質(zhì)TH免疫組化(S-P法)染色檢查和TUNEL法檢測(cè)DA能神經(jīng)細(xì)胞凋亡。連接顯微圖像分析系統(tǒng)測(cè)量平均光密度值(AOD)。
　　結(jié)果：
　　1造模第28天模型組和正常組觀察指標(biāo)比較
　　1.1模型組和正常組大鼠行為學(xué)比較
　　懸掛實(shí)驗(yàn)：模型組評(píng)分值明顯低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<

6、0.01)；網(wǎng)格實(shí)驗(yàn)：模型組大鼠移動(dòng)潛期長(zhǎng)于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；開(kāi)闊實(shí)驗(yàn)：模型組大鼠靜止性蹲坐時(shí)間長(zhǎng)于正常組(P<0.05)，而站立時(shí)間短于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　1.2模型組和正常組大鼠中腦黑質(zhì)SOD活力、GSH、GSH-Px、MDA含量比較
　　正常組大鼠SOD活力高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；GSH含量高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；GSH-P

7、x含量高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；MDA含量低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　1.3模型組和正常組大鼠中腦黑質(zhì)TH及DA能神經(jīng)細(xì)胞凋亡比較
　　正常組中腦黑質(zhì)DA能神經(jīng)元形態(tài)完整，細(xì)胞排列相對(duì)整齊；核呈圓形或錐形，大而清晰，核仁明顯；神經(jīng)纖維排列整齊，結(jié)構(gòu)緊密。模型組神經(jīng)元部分輕度腫脹，體積增大，細(xì)胞間隙增寬；細(xì)胞核形態(tài)不一，體積增大，偏居一側(cè)，核仁不明顯；神經(jīng)纖維排列紊亂，結(jié)構(gòu)疏松。

8、r>　　正常組中腦黑質(zhì)TH免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元呈棕褐色，密集分布，數(shù)量較多，胞體較大，神經(jīng)元突起明顯。模型組中腦黑質(zhì)TH免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，神經(jīng)元胞體輪廓及突起不清晰。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理AOD值顯示，模型組大鼠黑質(zhì)TH陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)與正常組相比明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　與正常組相比，模型組出現(xiàn)大量凋亡細(xì)胞，統(tǒng)計(jì)學(xué)處理AOD值顯示，模型組大鼠黑質(zhì)凋亡細(xì)胞數(shù)明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　

9、2治療前后正常組、模型組、西藥組和電針組觀察指標(biāo)比較
　　2.1治療前后各組大鼠行為學(xué)比較
　　懸掛實(shí)驗(yàn)：治療前模型組、西藥組和電針組評(píng)分值均低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；模型組、西藥組和電針組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后模型組評(píng)分值低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；電針組評(píng)分值高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；西藥組評(píng)分值與模型組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.0

10、5)；電針組評(píng)分值與西藥組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　網(wǎng)格實(shí)驗(yàn)：治療前模型組、西藥組和電針組大鼠移送潛伏期均高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；模型組、西藥組和電針組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后模型組大鼠移動(dòng)潛伏期高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；電針組低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；西藥組與模型組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；電針組與西藥組相比，

11、差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　開(kāi)闊實(shí)驗(yàn)：治療前模型組、西藥組和電針組大鼠靜止性蹲坐時(shí)間均高于正常組，站立時(shí)間均低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；模型組、西藥組和電針組之間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。治療后電針組和西藥組靜止性蹲坐時(shí)間均低于模型組，站立時(shí)間均高于模型組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；電針組靜止性蹲坐時(shí)間與西藥組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，站立時(shí)間低于西藥組，差異有統(tǒng)計(jì)

12、學(xué)意義(P<0.01)。
　　2.2治療后各組大鼠中腦黑質(zhì)SOD活力、GSH、GSH-Px、MDA含量比較
　　SOD活力比較：模型組低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；電針組高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；西藥組與模型組相比，差異無(wú)顯著意義(P>0.05)；電針組高于西藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。GSH含量比較：模型組低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；電針組高于模型組，差異有

13、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；西藥組與模型組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；電針組與西藥組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。GSH-Px含量比較：模型組低于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；電針組高于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；西藥組與模型組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；電針組高于西藥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。MDA含量比較：模型組高于正常組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；電針

14、組低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；西藥組低于模型組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；電針組與西藥組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.3治療后大鼠中腦黑質(zhì)Th及DA能神經(jīng)細(xì)胞凋亡的變化
　　模型組與正常組相比DA能神經(jīng)元部分輕度腫脹，體積增大，細(xì)胞間隙增寬；細(xì)胞核形態(tài)不一，體積增大，偏居一側(cè)，核仁不明顯；神經(jīng)纖維排列紊亂，結(jié)構(gòu)疏松。電針組與模型組相比DA能神經(jīng)元改善明顯，神經(jīng)元腫脹減少減輕，體積

15、變小，細(xì)胞間隙變窄；細(xì)胞形態(tài)較規(guī)則，體積較正常，核仁較明顯，神經(jīng)纖維排列較整齊，結(jié)夠較密集，西藥組改善差于電針組，優(yōu)于模型組。
　　模型組與正常組相比TH免疫反應(yīng)陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，神經(jīng)元胞體輪廓及突起不清晰。電針組與模型組相比TH改善明顯，陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)目增多，神經(jīng)元胞體輪廓及突起較情。西藥組改善差于電針組，優(yōu)于模型組。電針組、西藥組均差于正常組。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理AOD值顯示，模型組與正常組相比，TH陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

16、義(P<0.01)；電針組與模型組相比，TH陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；西藥組與模型組相比，TH陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；電針組與西藥組相比，TH陽(yáng)性神經(jīng)元數(shù)增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　模型組與正常組相比中腦黑質(zhì)DA能神經(jīng)細(xì)胞凋亡明顯，模型組出現(xiàn)大量凋亡細(xì)胞。電針組、西藥組與模型組相比凋亡細(xì)胞減少，且電針組凋亡細(xì)胞數(shù)少于西藥組。統(tǒng)計(jì)學(xué)處理AOD值顯示，模型組與正常

17、組相比，凋亡細(xì)胞數(shù)增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；電針組與模型組相比，凋亡細(xì)胞數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；西藥組與模型組相比，凋亡細(xì)胞數(shù)減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；電針組與西藥組相比，凋亡細(xì)胞數(shù)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1采用頸、背部皮下注射魚(yú)藤酮溶液制備PD大鼠模型，模型組動(dòng)物出現(xiàn)行為學(xué)改變，抗氧化能力下降，中腦黑質(zhì)DA神經(jīng)元嚴(yán)重受損，數(shù)目減少，細(xì)胞凋亡明顯，提示