羊組織中安乃近代謝物殘留量的測(cè)定.pdf

1、安乃近(Dipyrone，DIP)屬于呲唑酮類(lèi)非甾體抗炎藥，1922年最早在德國(guó)上市。由于其療效確切，價(jià)廉易得，因此在人醫(yī)和獸醫(yī)臨床上都有著廣泛的應(yīng)用，主要作為一些嚴(yán)重疾病的輔助對(duì)癥藥物。
　　由于安乃近在獸醫(yī)臨床上的大量廣泛使用和不合理用藥，使得其在動(dòng)物性食品中的殘留對(duì)人類(lèi)生命和財(cái)產(chǎn)的安全危害越來(lái)越大。目前，包括中國(guó)農(nóng)業(yè)部、歐洲共同體藥物評(píng)審委員會(huì)等組織都對(duì)安乃近在動(dòng)物組織中（包括豬、牛和馬）的最高殘留限量(MRLs)做出了規(guī)定

2、。安乃近被歸類(lèi)為一種典型的前藥，它在體內(nèi)迅速吸收、代謝，主要產(chǎn)生四種代謝產(chǎn)物:包括4-甲氨基安替比林(4-MAA)、4-甲酰氨基安替比林(4-FAA)、4-氨基安替比林(4-AA)和4-乙酰氨基安替比林(4-AAA)。其中MAA在體內(nèi)存留時(shí)間最長(zhǎng)、分布最為廣泛，因此以上組織統(tǒng)一將其規(guī)定為安乃近的殘留標(biāo)示物。目前，未見(jiàn)關(guān)于安乃近及其代謝物在羊不同組織（肌肉、脂肪、肝臟和腎臟）中殘留量的檢測(cè)的報(bào)道。
　　本論文研究的目的是建立一種快速

3、、靈敏、可信的LC-MS/MS檢測(cè)方法，用于檢測(cè)羊組織（肌肉、脂肪、肝臟和腎臟）中安乃近四種代謝產(chǎn)物的殘留。主要結(jié)論如下:
　　1.LC-MS/MS法鑒定羊血漿中安乃近代謝物
　　本試驗(yàn)通過(guò)給羊肌肉注射30 mg/kg bw的安乃近，采集羊新鮮靜脈血，離心后取血漿，采用三重四級(jí)桿質(zhì)譜全掃描、子離子掃描、多反應(yīng)監(jiān)測(cè)和中性丟失掃描四種方式對(duì)血漿中的安乃近代謝物進(jìn)行測(cè)定。試驗(yàn)證實(shí)血漿中存在安乃近的四種代謝產(chǎn)物AA、MAA、FAA和

4、AAA，證明安乃近在羊體內(nèi)的代謝和已知?jiǎng)游铮òㄘi、牛和馬）相似。佐證了本試驗(yàn)中對(duì)羊組織中AA、MAA、FAA和AAA進(jìn)行檢測(cè)的合理性。
　　2.羊肌肉、脂肪、肝臟和腎臟中安乃近四種代謝產(chǎn)物殘留方法的建立
　　建立了一種快速、靈敏、可靠的LC-MS/MS方法用于安乃近代謝物在羊肌肉、脂肪、肝臟和腎臟中的檢測(cè)。本試驗(yàn)選用乙腈和氨水的混合溶液作為提取溶劑對(duì)組織中的代謝物進(jìn)行提取，經(jīng)過(guò)無(wú)水硫酸鈉氯化鈉脫水、濃縮和復(fù)溶后，過(guò)Oasi

5、sTM MAX固相萃取柱凈化，使用親水作用色譜柱(HILIC)分離。待測(cè)物通過(guò)三重四級(jí)桿質(zhì)譜正離子模式下多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式進(jìn)行檢測(cè)，外標(biāo)法定量。結(jié)果顯示4-甲氨基安替比林、4-甲酰氨基安替比林和4-乙酰氨基安替比林在添加量為4-200μg/kg范圍內(nèi)線性良好;4-氨基安替比林在添加濃度為40-2000μg/kg范圍內(nèi)線性良好，四種待測(cè)物在所有組織中的回收率都在84.7％～113.2％的范圍內(nèi)，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于16.0％。MAA、

6、FAA和AAA在各組織中的檢測(cè)限均為0.08～1.2μg/kg，定量限為0.4～6μg/kg;AA在各個(gè)組織中的檢測(cè)限均為2～25μg/kg，定量限為10～125μg/kg。
　　3.實(shí)際樣品檢測(cè)
　　本方法用于對(duì)大型超市、農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)購(gòu)買(mǎi)的實(shí)際樣品和動(dòng)物試驗(yàn)給藥后采集的樣品進(jìn)行檢測(cè)。超市的實(shí)際樣品檢測(cè)中未檢出安乃近四種代謝產(chǎn)物超過(guò)最大殘留限量的濃度;動(dòng)物試驗(yàn)的實(shí)際檢測(cè)結(jié)果顯示四種代謝物的殘留量有隨著停藥時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸降低的趨

7、勢(shì)。結(jié)果進(jìn)一步驗(yàn)證了本方法在羊組織中檢測(cè)安乃近四種代謝產(chǎn)物的可行性。
　　綜上所述，本研究首先確定安乃近在羊體內(nèi)代謝產(chǎn)生了甲氨基安替比林、甲酰氨基安替比林、氨基安替比林和乙酰氨基安替比林四種主要代謝物。之后成功建立了在羊的肌肉、脂肪、肝臟和腎臟這四種組織中同時(shí)檢測(cè)安乃近四種代謝產(chǎn)物殘留的高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜分析方法，方法的靈敏度高，重現(xiàn)性好，準(zhǔn)確度和精密度都能滿(mǎn)足中國(guó)農(nóng)業(yè)部獸藥殘留相關(guān)文件規(guī)定的要求。而且本方法經(jīng)過(guò)檢測(cè)實(shí)際樣品的