1,25(OH)2VD3對人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞增殖及成骨分化的影響.pdf

1、背景與目的：
　　 干細(xì)胞具有很強的自我復(fù)制與多向分化潛能,在細(xì)胞治療、組織工程以及再生醫(yī)學(xué)領(lǐng)域內(nèi)均有廣闊的應(yīng)用前景,為目前一些無法治愈的重大疾病,如周圍神經(jīng)損傷、脊髓損傷、骨缺損等骨科棘手疾病的治療提供了嶄新的方向。人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞與人胚胎干細(xì)胞、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞和脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞相比,具有易于分離培養(yǎng),免疫原性低,體外增殖分化能力強等特性,具備作為理想的種子細(xì)胞的條件。在體外,培養(yǎng)條件是決定干細(xì)胞分化方向的調(diào)控器,適當(dāng)?shù)恼T

2、導(dǎo)劑如維生素C、甘油磷酸鈉、地塞米松及一些生長因子等均可有效誘導(dǎo)干細(xì)胞向成骨樣細(xì)胞分化。傳統(tǒng)的成骨誘導(dǎo)液,成分復(fù)雜,細(xì)胞毒性較大,因此建立一種理想的成骨誘導(dǎo)方案一直是人們研究的熱點。新近研究表明1,25(OH)2VD3不僅是一種全身性鈣、磷調(diào)節(jié)激素,同時還是細(xì)胞生長和分化的調(diào)節(jié)因子,可以調(diào)控干細(xì)胞的增殖與分化。本實驗旨在研究人臍帶組織間充質(zhì)干細(xì)胞(UCMSCs)體外分離擴增及鑒定的方法,并探討不同濃度的1,25(OH)2VD3對人UCM

3、SCs增殖及成骨分化的影響,嘗試為骨組織工程尋求一種新的體外成骨的方案。
　　 方法：
　　 在無菌條件下獲取正常足月剖腹產(chǎn)胎兒臍帶,利用組織塊貼壁培養(yǎng)法分離細(xì)胞,并進(jìn)行傳代培養(yǎng)及純化;取第2代生長良好的貼壁細(xì)胞,通過免疫組化法測定細(xì)胞表面特異標(biāo)志物表達(dá)的情況;取傳代培養(yǎng)的第三代人UCMSCs進(jìn)行細(xì)胞爬片,待細(xì)胞生長至60％-70%融合時分四組進(jìn)行干預(yù)實驗:設(shè)置10-7mol/L、10-9mol/L、10-11mol/L

4、3種濃度的1,25(OH)2VD3作為實驗組,并設(shè)空白對照組(常規(guī)DMEM培養(yǎng)基)。動態(tài)觀察干預(yù)前后各組細(xì)胞的形態(tài)變化,四唑鹽(MTT)比色法觀察細(xì)胞增殖,免疫組化法檢測堿性磷酸酶及Ⅰ型膠原蛋白表達(dá),茜素紅染色觀察礦化結(jié)節(jié)形成情況。將結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。
　　 結(jié)果：
　　 組織塊貼壁培養(yǎng)法可獲得人UCMSCs,鏡下可見最初為圓形,漸漸伸出突起,形成長條狀細(xì)胞,類似成纖維細(xì)胞,1W后擴增迅速,成漩渦狀生長。免疫細(xì)胞化學(xué)顯

5、示CD44、CD105陽性,CD34、CD45陰性,符合人UCMSCs的特征。1,25(0H)2VD3對人UCMSCs增殖的影響表現(xiàn)為少于7d促進(jìn)增殖,超過7d抑制增殖,高劑量組(10-7mol/L組)抑制干細(xì)胞增殖效應(yīng)更明顯。1,25(OH)2VD3對人UCMSCs成骨分化影響表現(xiàn)為10-11mol/L組促堿性磷酸酶和Ⅰ型膠原蛋白分泌作用高于10-7mol/L組、10-9mol/L組,低劑量1,25(OH)2VD3促進(jìn)成骨細(xì)胞分化作用