同位素相對(duì)標(biāo)記技術(shù)(iTRAQ)結(jié)合雙向液相色譜與質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)應(yīng)用于膝骨性關(guān)節(jié)炎血清差異蛋白的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎(Knee osteoarthritis，KOA)是最常見的關(guān)節(jié)疾患之一，主要表現(xiàn)為關(guān)節(jié)緩慢發(fā)展的疼痛、僵硬、腫大，伴關(guān)節(jié)功能障礙，甚至發(fā)生殘疾。隨著老齡化社會(huì)的到來(lái)，KOA對(duì)人類的健康和生存質(zhì)量影響增大，本病的發(fā)病率日趨升高，對(duì)其的研究已成為醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的重要課題。國(guó)內(nèi)外公認(rèn)的是膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎是一種長(zhǎng)期的、隱匿的慢性疾病。診斷通常是基于臨床癥狀和影像學(xué)變化。然而X線靈敏度、精確度相對(duì)比較差，目前臨床上的診斷手段不允許OA

2、的早期診斷或關(guān)節(jié)損傷進(jìn)展的評(píng)估。因此，尋找膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎的生物標(biāo)志物作為OA早期的診斷標(biāo)準(zhǔn)是目前研究的一個(gè)熱門方向。
　　蛋白質(zhì)組學(xué)能通過對(duì)全體蛋白質(zhì)表達(dá)的規(guī)模化分析，研究生物過程相關(guān)蛋白質(zhì)的動(dòng)態(tài)表達(dá)和功能的改變;對(duì)于尋找疾病診斷的特異性標(biāo)志物以及對(duì)疾病的發(fā)病機(jī)理的研究來(lái)說(shuō)，是一種有效的高通量的研究方法，可以獲得傳統(tǒng)手段無(wú)法得到的蛋白標(biāo)志物，目前已經(jīng)成為尋找新的腫瘤蛋白標(biāo)志物的主要方法。
　　本研究我們首先運(yùn)用蛋白質(zhì)組學(xué)研

3、究方法及手段，通過對(duì)膝骨性關(guān)節(jié)炎K-L0、Ⅱ、Ⅳ級(jí)的3個(gè)亞組的血清進(jìn)行差異蛋白質(zhì)組學(xué)分析，篩選出了一些有潛在診斷價(jià)值的差異蛋白質(zhì)，并對(duì)其中部分差異蛋白質(zhì)進(jìn)行了驗(yàn)證和進(jìn)一步分析。
　　目的:通過對(duì)膝骨性關(guān)節(jié)炎K/L分級(jí)的各階段的血清樣本進(jìn)行ITRAQ定量蛋白組學(xué)分析檢測(cè)進(jìn)行差異蛋白的篩選，以發(fā)現(xiàn)膝骨性關(guān)節(jié)炎各個(gè)時(shí)期的的潛在分子標(biāo)志物。
　　方法:收集膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎患者60例，參照Kellgren-Lawrence(K-L)分

4、級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，分為K-L0、Ⅱ、Ⅳ級(jí)的亞組，每個(gè)亞組隨機(jī)選取10例男性與10例女性。去除血清高豐度蛋白，進(jìn)行穩(wěn)定同位素116、117、118的iTRAQ標(biāo)記、反相色譜柱分離、質(zhì)譜檢測(cè)及Swissport數(shù)據(jù)庫(kù)檢索;再利用生物信息學(xué)軟件進(jìn)行分析。對(duì)的部分差異蛋白進(jìn)行Western Blot驗(yàn)證。
　　結(jié)果:通過對(duì)不同樣品的iTRAQ肽段實(shí)驗(yàn)標(biāo)記、Q-star質(zhì)譜鑒定和MASCOT搜庫(kù)，共篩選出有意義差異蛋白169個(gè)，K-L0級(jí)與K-LⅣ級(jí)

5、差異蛋白153個(gè);K-L0級(jí)與K-LⅡ級(jí)差異蛋白153個(gè);K-LⅡ級(jí)與K-LⅣ級(jí)差異蛋白145個(gè)。Western Blot驗(yàn)證的ADIPOQ、CRP兩個(gè)差異蛋白與實(shí)驗(yàn)iTRAQ定量蛋白組學(xué)分析檢測(cè)的結(jié)果相符合。
　　結(jié)論:1.應(yīng)用iTRAQ技術(shù)可篩選出與膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎發(fā)生發(fā)展相關(guān)的多個(gè)差異蛋白。提示iTRAQ技術(shù)對(duì)于膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎蛋白質(zhì)組學(xué)血清生物標(biāo)記物的研究有很好的應(yīng)用前景。
　　2.Adiponectin可能是診斷膝