果蠅Dx16多克隆抗體的制備及基因表達(dá)型分析.pdf

1、前體mRNA剪接在真核細(xì)胞基因表達(dá)產(chǎn)物多樣性、基因表達(dá)的時(shí)空差異性方面具有重要作用.SR(Serine-Arginine rich)蛋白是具有幫助識別正確剪接位點(diǎn)并促進(jìn)剪接體成熟功能的一類重要剪接因子.Dxl6是果蠅SR蛋白家族的新成員.已有RNA原位雜交的研究提示,Dxl6是果蠅胚胎發(fā)育過程中中樞神經(jīng)系統(tǒng)特異性表達(dá)的基因.為了能夠深入研究Dxl6蛋白的功能,了解其在果蠅胚胎及胚胎后發(fā)育,尤其是中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育中的作用,通過基因工程的亞

2、克隆技術(shù),在體外融合表達(dá)純化Dxl6兩段截短蛋白,免疫動(dòng)物后制備并分別純化抗Dxl6蛋白RS結(jié)構(gòu)域和抗Dxl6蛋白中間部分的兩種多克隆抗體,經(jīng)免疫印跡法鑒定結(jié)果顯示,用兩種抗體在原核表達(dá)體系中分別檢測目的蛋白時(shí)均出現(xiàn)特異性的顯色帶,而只有抗Dxl6蛋白RS結(jié)構(gòu)域的抗體能特異識別果蠅組織中的Dxl6蛋白.利用抗Dxl6蛋白RS結(jié)構(gòu)域的抗體通過果蠅胚胎的免疫染色技術(shù),分別檢測了Dxl6蛋白在野生型黑腹果蠅胚胎中的分布型及其亞細(xì)胞定位,進(jìn)而在

3、P因子插入突變體果蠅k00213、Nop5<'k00230>/Cyo和Doa<'01705b>/TM3三種品系的胚胎中檢測Dxl6蛋白的表達(dá)情況并作統(tǒng)計(jì)分析.結(jié)果顯示,Dxl6蛋白在野生型黑腹果蠅胚胎發(fā)育的早期分布廣泛,后期逐漸集中于中樞神經(jīng)系統(tǒng);而且早期主要集中于細(xì)胞核內(nèi),后期在細(xì)胞核與細(xì)胞質(zhì)中均有分布;在三種突變體果蠅胚胎中都有約1/4胚胎未檢測到Dxl6蛋白的表達(dá),而其余胚胎中該蛋白的表達(dá)分布與野生型一致.該研究為Dxl6蛋白研究