激素對人骨髓間充質(zhì)干細胞神經(jīng)肽受體mRNA表達的影響.pdf

1、背景：
　　 激素引起非創(chuàng)傷性股骨頭壞死(osteonccrosis of the femoral head,ONFH)的發(fā)病機制存在著諸多學說,近年來,神經(jīng)調(diào)節(jié)因素在激素性ONFH發(fā)病中的作用日益受到人們的重視。骨組織神經(jīng)參與骨代謝,其中以肽能神經(jīng)與骨的關系最為緊密。肽能神經(jīng)通過分泌神經(jīng)肽產(chǎn)生生物效應,其中以降鈣素基因相關肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)和P物質(zhì)(substance

2、 P,SP)的作用最為明顯,CGRP和SP分別作用于骨組織內(nèi)各種細胞上的相應受體,調(diào)節(jié)骨修復與重建、影響骨代謝。骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stemcells,BMSCs)是骨生成和代謝中重要基質(zhì)細胞,也是激素性ONFH發(fā)生機制中重要細胞學基礎。研究發(fā)現(xiàn),在BMSCs細胞表面存在著CGRP和SP的相應受體,即降鈣素基因相關肽受體CGRPR和P物質(zhì)受體SPR,神經(jīng)肽通過作用于CGRPR和SPR,影響B(tài)

3、MSCs內(nèi)物質(zhì)表達與代謝。
　　 目的：
　　 體外分離培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs),觀察激素對BMSCs細胞內(nèi)神經(jīng)肽受體CGRPR、SPR以及過氧化物酶體增殖子活化受體γ(peroxisomeproliferators-activated receptorγ,PPARγ)、成骨轉(zhuǎn)錄因子Runx2等基因mRNA表達的影響,探索神經(jīng)肽在激素性ONFH所起到的作用及作用機制。
　　 方法：
　　 密度

4、梯度離心聯(lián)合貼壁分選法體外分離培養(yǎng)BMSCs,倒置相差顯微鏡下觀察細胞形態(tài)。流式細胞儀鑒定細胞表面標志物后,傳至第3代隨機分為兩組,實驗組細胞給予10-7mol/L地塞米松干預9d,對照組正常培養(yǎng)。觀察細胞形態(tài)、生長趨勢,繪制細胞生長曲線,油紅O染色脂肪細胞,實時熒光定量-聚合酶鏈反應技術(RT-qPCR)分析CGRPR、SPR、PPARγ、Runx2等的mRNA表達的變化。
　　 結(jié)果：
　　 1.分離培養(yǎng)的貼壁細胞呈

5、梭形、纖維細胞樣,漩渦樣、放射狀生長,流式細胞儀分析CD29、CD44表達率(91.4±0.7)％、(93.8±0.5)%,CD34表達率(2.7±0.8)%,符合BMSCs生物學特性,說明所獲得的貼壁細胞是BMSCs。
　　 2.生長曲線顯示,實驗組地塞米松干預后細胞生長緩慢,對照組細胞增殖旺盛。油紅O染色證明,實驗組BMSCs細胞內(nèi)出現(xiàn)脂滴,向脂肪細胞方向大量分化,對照組未見細胞內(nèi)脂滴出現(xiàn)。
　　 3.實驗組CGRP

6、R mRNA、SPR mRNA、Runx2 mRNA的表達顯著降低,下降率分別為0.10±0.03、0.16±0.04、0.23±0.05(P均＜0.01),以CGRPR mRNA下降最為明顯,兩組相比,實驗組CGRPR mRNA表達量僅占對照組的10%。實驗組PPARγ mRNA表達明顯上調(diào),實驗組PPARγ mRNA表達量較照組升高5.08±3.37倍,差異有統(tǒng)計學意義(p＜0.01)。
　　 結(jié)論：
　　 1.激素