一次性靜態(tài)芯片實時熒光定量聚合酶鏈反應方法研究.pdf

1、實時熒光定量聚合酶鏈反應(Real-timeFQ-PCR)是一種DNA的定量分析方法，它對特定序列的DNA具有靈敏度高、特異性強等特點，在分子生物學及臨床醫(yī)學診斷研究中應用日益廣泛。常用的臺式定量PCR儀的樣品及試劑用量大，在速度及通量方面也難以滿足越來越多的分析需要，此外床邊護理檢驗也要求檢測系統(tǒng)便攜化。因此，定量PCR儀的微型化和通量化成為科研人員關注的焦點。
　　 論文第一章對實時熒光定量PCR的研究方法及PCR芯片的研究

2、現(xiàn)狀進行了綜述，提出在氧化銦錫(ITO)玻璃芯片上進行實時熒光定量PCR進行定量分析的可行性。
　　 第二章在已有靜態(tài)ITO玻璃溫控芯片研究的基礎上，對溫度控制及校正方法進行了進一步的研究，通過在芯片上粘結(jié)銅箔的方法提高了PCR反應的可靠性。
　　 第三章以倒置熒光顯微鏡為基本平臺初步建立了芯片實時熒光定量PCR檢測系統(tǒng)，對激發(fā)光源，光電倍增管(PMT)及顯微鏡的操作條件進行了優(yōu)化。利用藍光發(fā)光二極管(LED)作為激發(fā)光

3、源，在光源電流300mA,PMT電壓600V，25倍顯微物鏡下進行了實時熒光檢測，取得了較好的結(jié)果。
　　 第四章在ITO玻璃溫控芯片上首次實現(xiàn)了基于靜態(tài)溫控模式的實時熒光定量PCR，以SYBRGreenI為熒光染料對λDNA模板的定量方法進行了展示。通過并行反應和一次性使用的方法提高通量的同時也有效地避免了交叉污染問題。在3.8×105～3.8×108初始拷貝范圍內(nèi)取得了很好的線性，標準曲線斜率為-4.9，截距52.5，線性相