LncRNA HIF1A-AS2、SUMO1P3和PCNA-AS1在結(jié)直腸癌中的表達(dá)與功能研究.pdf

1、結(jié)直腸癌(colorectal cancer,CRC)是世界最常見的惡性腫瘤之一，是導(dǎo)致全球癌癥相關(guān)死亡的重要原因。中國發(fā)病率總體呈上升趨勢，在所有惡性腫瘤中發(fā)病率和死亡率均位居第5位。結(jié)直腸癌的發(fā)病機(jī)制目前仍不明確，目前認(rèn)為是環(huán)境因素和基因遺傳特點(diǎn)共同長期作用的結(jié)果。腫瘤易感基因活化、抑癌基因修飾失活、信號通路調(diào)節(jié)異常和非編碼RNA多層面調(diào)節(jié)蛋白編碼基因等多種因素均與結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。長鏈非編碼RNA在結(jié)直腸腫瘤發(fā)生、發(fā)展過程中

2、發(fā)揮重要作用的，它們經(jīng)由不同層次、通過不同作用機(jī)制，發(fā)揮促進(jìn)或抑制結(jié)直腸癌的發(fā)生發(fā)展作用。
　　本課題分為五部分，研究了三種長鏈非編碼RNA HIF1A-AS2、SUMO1P3和PCNA-AS1在結(jié)直腸癌組織和細(xì)胞中的表達(dá)情況，分析了其表達(dá)水平與腫瘤臨床病理特征之間的關(guān)系，探討了該基因在結(jié)腸癌細(xì)胞中的功能，并提出下一步研究的方向。
　　第一部分 結(jié)直腸癌HIF1A-AS2表達(dá)及其與臨床病理特征關(guān)系
　　目的:檢測HIF

3、1A-AS2在結(jié)直腸癌組織和癌旁正常上皮組織之間表達(dá)的差異，研究HIF1A-AS2表達(dá)水平和腫瘤臨床病理特征之間的關(guān)系。
　　方法:用qPCR檢測57對114例手術(shù)切除結(jié)直腸癌和癌旁正常組織標(biāo)本中HIF1A-AS2的表達(dá)，收集患者的臨床病理特征信息，研究其表達(dá)水平與患者臨床病理特征之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:在57例結(jié)直腸癌標(biāo)本中HIF1A-AS2表達(dá)明顯升高，33例腫瘤組樣本HIF1A-AS2表達(dá)高于正常組，24例低于正常組，

4、具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.001），兩組樣本的相對表達(dá)量-ΔΔCT=0.832，差異倍數(shù)2--ΔΔCT=1.781倍。HIF1A-AS2的表達(dá)水平與結(jié)直腸癌組織分化等級顯著正相關(guān)，G1級的HIF1A-AS2表達(dá)較低，G2和G3級的表達(dá)較高。HIF1A-AS2的表達(dá)與其他因素，包括性別、年齡、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和發(fā)病部位等無明顯關(guān)系。
　　結(jié)論:HIF1A-AS2在結(jié)直腸癌中表達(dá)明顯高于正常組織，其表達(dá)與結(jié)直腸癌組織

5、分化等級正相關(guān)。
　　第二部分 HIF1A-AS2在結(jié)腸癌細(xì)胞系中的功能研究
　　目的:檢測HIF1A-AS2在結(jié)腸癌細(xì)胞和正常上皮細(xì)胞之間的表達(dá)差異，研究HIF1A-AS2對結(jié)腸癌細(xì)胞功能的影響。
　　方法:用qPCR檢測結(jié)腸癌細(xì)胞系SW620、HT29、HCT116、DLD-1和正常結(jié)腸上皮細(xì)胞系NCM460中HIF1A-AS2的表達(dá)，選擇高表達(dá)的SW620細(xì)胞系進(jìn)行基因干擾，檢測HIF1A-AS2干擾效率后，分別

6、進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)、Edu實(shí)驗(yàn)、Hoechst33342染色實(shí)驗(yàn)，探索HIF1A-AS2對結(jié)腸癌細(xì)胞的周期、增殖和凋亡的影響。
　　結(jié)果:HIF1A-AS2在結(jié)腸癌細(xì)胞系中的表達(dá)明顯高于正常上皮細(xì)胞系。干擾降低HIF1A-AS2后，腫瘤細(xì)胞停滯于G1期，Edu陽性細(xì)胞比例明顯減少，增殖細(xì)胞比例下降了43.78％，抑制結(jié)腸癌細(xì)胞增殖作用明顯。Hoechst33342染色提示，si-HIF1A-AS2組較si-NC組細(xì)胞凋亡率明顯增加。經(jīng)

7、流式細(xì)胞儀檢測，結(jié)果顯示si-HIF1A-AS2組的細(xì)胞凋亡率明細(xì)賬就，si-NC組的凋亡率為8.03％，si-HIF1A-AS2組的凋亡率為22.38％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01）。
　　結(jié)論:HIF1A-AS2在結(jié)腸癌細(xì)胞系表達(dá)明顯高于正常上皮細(xì)胞系NCM460，沉默HIF1A-AS2后，腫瘤細(xì)胞停滯于G1期，細(xì)胞增殖減少，細(xì)胞凋亡增加。
　　第三部分 結(jié)直腸癌SUM01P3表達(dá)及其與臨床病理特征關(guān)系
　　

8、目的:檢測SUMO1P3在結(jié)直腸癌組織和癌旁正常上皮組織之間表達(dá)的差異，研究SUMO1P3表達(dá)水平和腫瘤臨床病理特征之間的關(guān)系。
　　方法:用qPCR檢測57對114例手術(shù)切除結(jié)直腸癌和癌旁正常組織標(biāo)本中SUMO1P3的表達(dá)，收集患者的臨床病理特征信息，研究SUMO1P3表達(dá)水平與患者臨床病理特征之間的關(guān)系。
　　結(jié)果:在57對臨床標(biāo)本中，37例腫瘤組樣本SUMO1P3表達(dá)高于正常組，20例低于正常組，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p

9、＜0.001），兩組樣本的相對表達(dá)量-ΔΔCT=1.463，差異倍數(shù)為2.757倍。ROCAUC(Area under the ROC)為0.677(95％可信區(qū)間0.576～0.778，p＜0.001)，截?cái)帱c(diǎn)(ΔCT)為1.526。敏感度和特異度分別是0.912和0.474，正確指數(shù)為0.386。SUMO1P3的表達(dá)與CRC患者的臨床病理特征的無顯著關(guān)系。
　　結(jié)論:SUMO1P3在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)明顯高于正常組織，SUM

10、O1P3可作為潛在的結(jié)直腸癌診斷標(biāo)志物。
　　第四部分 SUM01P3在結(jié)腸癌細(xì)胞系中的功能研究
　　目的:檢測SUMO1P3在結(jié)腸癌細(xì)胞和結(jié)腸正常上皮細(xì)胞之間表達(dá)的差異，研究SUMO1P3對結(jié)腸癌細(xì)胞功能的影響。
　　方法:用qPCR檢測結(jié)腸癌細(xì)胞系SW620、HT29、HCT116、DLD-1和正常上皮細(xì)胞系NCM460中SUMO1P3的表達(dá)，選擇高表達(dá)的SW620細(xì)胞系進(jìn)行基因干擾，檢測SUMO1P3干擾效率后，

11、分別進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)、Edu實(shí)驗(yàn)、Hoechst33343染色實(shí)驗(yàn)，研究SUMO1P3對結(jié)腸癌細(xì)胞的周期、增殖和凋亡的影響。
　　結(jié)果:SUMO1P3在結(jié)腸癌細(xì)胞系中的表達(dá)明顯高于正常細(xì)胞系。干擾降低SUMO1P3后，腫瘤細(xì)胞停滯于G1期，Edu陽性細(xì)胞比例明顯減少，增殖細(xì)胞比例下降了32.56％，結(jié)腸癌細(xì)胞增殖受到明顯抑制。Hoechst33342染色顯示，si-SUMO1P3組細(xì)胞凋亡率明顯增加。流式細(xì)胞儀檢測，si-SUMO1

12、P3組凋亡率明顯增高，si-NC組的凋亡率為8.03％，si-SUMO1P3組的凋亡率為24.86％，兩組凋亡率的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001)。
　　結(jié)論:SUMO1P3在結(jié)腸癌細(xì)胞系中的表達(dá)明顯高于正常結(jié)腸上皮細(xì)胞系，下調(diào)SUMO1P3后，腫瘤細(xì)胞停滯于G1期，細(xì)胞增殖減少，細(xì)胞凋亡增加。
　　第五部分 結(jié)直腸癌PCNA-AS1表達(dá)及其與臨床病理特征關(guān)系
　　目的:檢測PCNA-AS1在結(jié)直腸癌組織和癌旁上皮

13、組織之間表達(dá)的差異，研究PCNA-AS1表達(dá)水平和腫瘤臨床病理特征之間的關(guān)系。
　　方法:用qPCR檢測57對114例手術(shù)切除結(jié)直腸癌和癌旁正常組織標(biāo)本中PCNA-AS1的表達(dá)，收集患者的臨床病理特征信息，研究PCNA-AS1表達(dá)水平與患者臨床病理特征之間的關(guān)系。此外，研究了結(jié)腸癌細(xì)胞中PCNA-AS1的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:在57對標(biāo)本中，48例腫瘤組樣本PCNA-AS1表達(dá)高于正常組，9例低于正常組，具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(

14、p＜0.001)，兩組樣本的相對表達(dá)量-ΔΔCT=1.819，差異倍數(shù)為3.529倍。PCNA-AS1表達(dá)與侵犯深度、TNM分期正相關(guān)，與其他因素，包括性別、年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和發(fā)病部位、組織分化等無顯著關(guān)系。ROCAUC為0.824，截?cái)帱c(diǎn)(ΔCT)為4.164。敏感度和特異度分別是0.632和0.86，正確指數(shù)為0.491。PCNA-AS1在結(jié)腸癌細(xì)胞系中表達(dá)明顯高于結(jié)腸正常上皮細(xì)胞系。
　　結(jié)論:在結(jié)直腸癌組織和細(xì)胞