免疫耐受治療顱腦創(chuàng)傷的基礎(chǔ)和臨床研究.pdf

1、顱腦創(chuàng)傷后首先由暴力損傷腦屏障組織和腦組織，接著免疫系統(tǒng)被調(diào)動激活，造成繼發(fā)性腦屏障及腦組織損傷。本項研究目的是通過阻斷或干預(yù)免疫系統(tǒng)的繼發(fā)性損害來達到治療顱腦損傷的目的。
　　 一、顱腦創(chuàng)傷后蛛網(wǎng)膜顆粒通透性的實驗研究
　　 目的：證實顱腦創(chuàng)傷后蛛網(wǎng)膜顆粒通透性增加。
　　 方法：顱腦創(chuàng)傷后，對各組進行寰枕膜穿刺，創(chuàng)傷組和對照組分別抽出腦脊液0.5ml，將10mg/ml亞甲藍溶液0.5ml注入小腦延髓池。于C組

2、(注射對照腦脊液組)和D組(注射創(chuàng)傷腦脊液組)分別抽出腦脊液1ml，將10mg/ml亞甲藍溶液0.5ml混入對照組腦脊液0.5ml注入C組小腦延髓池，10mg/ml亞甲藍溶液0.5ml混入創(chuàng)傷組腦脊液0.5ml注入D組小腦延髓池。處理后第1天和第3天抽取各組實驗兔耳緣靜脈血2ml，離心取血漿備用，在固相萃取裝置提取其中的亞甲藍并測算出其濃度。ELISA法檢測血漿中TNF-α濃度。
　　 結(jié)果：關(guān)于血清中亞甲藍濃度及TNF-α濃度

3、，創(chuàng)傷后較對照組明顯增高；注射對照腦脊液組較對照組增高；注射創(chuàng)傷腦脊液組較注射對照腦脊液組顯著增高；注射創(chuàng)傷腦脊液組與創(chuàng)傷組無明顯區(qū)別。
　　 結(jié)論：顱腦創(chuàng)傷可以導(dǎo)致蛛網(wǎng)膜顆粒通透性增強，但除暴力本身外，繼發(fā)的炎性反應(yīng)發(fā)生了更大的作用。
　　 二、口服免疫耐受治療顱腦損傷的實驗和臨床研究
　　 目的：通過口服自身腦脊液誘發(fā)口服免疫耐受，并觀察其治療顱腦創(chuàng)傷的作用。
　　 方法：制作兔顱腦創(chuàng)傷模型后，各組于

4、第0-7日取小腦延髓池腦脊液1ml，A組再注回小腦延髓池；B組將腦脊液丟棄；C組將腦脊液1ml自胃管內(nèi)注入大白兔胃內(nèi)；D組創(chuàng)傷后給予后足墊注射完全弗氏佐劑50ug，將腦脊液1ml自胃管內(nèi)注入大白兔胃內(nèi)。所有實驗兔于第1，3，7，14，21天抽取耳緣靜脈血2ml，離心去血清待測，并于21天處死取腦，4％多聚甲醛固定備用。用ELISA法測血清中IL-1、IFN-γ、IL-10、TGF-β和抗腦抗體濃度。周圍血細(xì)胞計數(shù)。免疫組化染色觀察谷氨酸

5、表達情況；HE染色觀察神經(jīng)元變化。90例患者隨機平均分為三組，于第2-7日每日晨起行要椎穿刺，取4ml腦脊液送化驗檢測蛋白含量。a組立即拔針；b組繼續(xù)放出腦脊液10ml棄去不用；c組繼續(xù)放出腦脊液10ml，腦脊液經(jīng)鼻小腸管喂飼患者。傷后第1、3、7、14、21天晨起空腹抽取靜脈血4ml，檢測抗腦抗體濃度。
　　 結(jié)果：腦脊液引流組(B組)、口服腦脊液組(C組)、和免疫佐劑組(D組)中IL-1、IFN-γ、抗腦抗體濃度及周圍白細(xì)胞

6、計數(shù)較對照組降低(P<0.05)，其中C組降低最多；而IL-10和TGF-β濃度較對照組升高(P<0.05)，C組升高最多。C組谷氨酸表達和神經(jīng)元退行性變最少，B組和D組居中。臨床試驗中，c組(口服腦脊液組)抗腦抗體水平和腦脊液蛋白含量最低，b組(腦脊液引流組)居中，均低于對照組(P<0.05)。
　　 結(jié)論：創(chuàng)傷后腦脊液蛋白含量增多，腦脊液引流可以減少抗原釋放，從而減少腦組織免疫損傷；口服腦脊液可以誘導(dǎo)出免疫耐受，減少免疫損傷

7、；完全弗氏佐劑可以部分抑制口服免疫耐受。腦脊液引流及口服腦脊液對顱腦損傷具有治療作用。
　　 三、細(xì)胞療法誘導(dǎo)免疫耐受治療顱腦損傷的實驗研究
　　 目的：觀察未成熟樹突狀細(xì)胞及臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞在顱腦創(chuàng)傷后的免疫調(diào)節(jié)作用。
　　 方法：制作兔顱腦創(chuàng)傷模型后，B組用選用5代臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞107于傷后第1，2，3天予以耳緣靜脈注射，；C組取未成熟樹突狀細(xì)胞107于傷后第1，2，3天注射入患兔耳緣靜脈；A組作創(chuàng)傷對照組

8、。均于并于傷后第1，3，7，14、21天采取耳緣靜脈血4ml，離心取血清備用。用ELISA法測血清中IL-1、IFN-γ、IL-10、TGF-β和抗腦抗體濃度。
　　 結(jié)果：干細(xì)胞組(B組)和樹突狀細(xì)胞組(C組)中IL-1、IFN-γ、抗腦抗體濃度及周圍白細(xì)胞計數(shù)較對照組降低(P<0.05)，而IL-10和TGF-β濃度較對照組升高(P<0.05)。
　　 結(jié)論：未成熟樹突狀細(xì)胞和干細(xì)胞的靜脈注射均可以誘導(dǎo)顱腦創(chuàng)傷后的免