F蛋白誘導(dǎo)大鼠肝移植免疫耐受的初步研究.pdf

1、隨著肝移植技術(shù)的不斷進(jìn)步和完善，使得越來(lái)越多的終末期肝病患者的生存期得到了很大程度的延長(zhǎng)。但急性排斥反應(yīng)(Acute Rejection，AR)仍然是肝移植術(shù)后最嚴(yán)重的并發(fā)癥之一，其發(fā)生率仍然高達(dá)40％-60％，因此免疫耐受仍然是肝移植研究的重點(diǎn)之一。免疫耐受的機(jī)制有很多學(xué)說(shuō)，各種高效免疫抑制劑也在不斷推出，但是近年來(lái)越來(lái)越多的關(guān)注肝臟特異性蛋白(F蛋白)誘導(dǎo)肝移植術(shù)后免疫耐受的研究，使我們對(duì)肝移植免疫耐受的發(fā)生、發(fā)展有了更進(jìn)一步的理解

2、。
　　 F蛋白的表達(dá)及純化。
　　 本文在前人研究的基礎(chǔ)上，將F蛋白原核表達(dá)載體pET-15b轉(zhuǎn)化的大腸桿菌表達(dá)菌BL21(DE3)pLysS，用IPTG誘導(dǎo)其表達(dá)，表達(dá)后通過(guò)親和層析柱(Ni2+-charged IDA His-blnd column)純化，用十二烷基硫酸鈉-聚丙稀酞胺凝膠電泳與免疫印跡(Western blot)對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)。人F蛋白的表達(dá)菌株BL21(DE3)pLysS表達(dá)后的全菌蛋白進(jìn)行SDS-

3、PAGE電泳檢測(cè)，目的條帶分子量大小約為43kD，與文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)一致。western-blot顯示純化后的F蛋白與豚鼠抗人提純F蛋白多克隆抗血清反應(yīng)為陽(yáng)性，說(shuō)明我們經(jīng)基因工程方法得到的純化的F蛋白具有免疫活性。
　　 F蛋白誘導(dǎo)大鼠肝移植免疫耐受的初步研究。
　　 為了觀察兩種不同品系即近交系Wistar和封閉群SD大鼠原位肝移植術(shù)后的急性排斥反應(yīng)及F蛋白誘導(dǎo)肝移植免疫耐受的情況。我們將健康雄性清潔的近交系Wistar和封閉

4、群SD大鼠隨機(jī)分為3組，A：同基因?qū)φ战M：SD→SD；B：急性排斥組：Wistar→SD；C：F蛋白干預(yù)組：術(shù)前一周胸腺內(nèi)注射0.4mg。采用Kamada二袖套法，建立上述Wistar和SD組合之間的肝移植模型。A、B和C組受體分別于術(shù)后3d、6d、9d及100d，四個(gè)時(shí)間點(diǎn)各殺死三只大鼠，收集肝組織和血清分別做相應(yīng)檢測(cè)，另留取部分新鮮肝組織立即置入液氮中保存?zhèn)溆?。剩余的大鼠用于觀察肝移植術(shù)后長(zhǎng)期生存率。實(shí)驗(yàn)過(guò)程中共完成108例次大鼠原

5、位肝移植(ratorthotopic liver transplantation，ROLT)操作，總的手術(shù)成功率為62.96％(68/108)，其中模型訓(xùn)練的前期完成45例，24h成活率僅24.44％(11/45)以后隨著手術(shù)技巧成熟，手術(shù)成功率逐漸達(dá)到90％以上。大鼠肝移植手術(shù)死亡的主要原因?yàn)槌鲅?、麻醉意外、無(wú)肝期太長(zhǎng)、血栓形成等。A組同基因?qū)φ战M，術(shù)后組織學(xué)檢查無(wú)排斤反應(yīng)表現(xiàn)。B組急性排斥組自術(shù)后3d開(kāi)始，出現(xiàn)Ⅰ級(jí)排斥反應(yīng)，6d以后