大黃蒽醌類化合物與腎臟OATs及馬兜鈴酸A與腸道外排轉(zhuǎn)運(yùn)體相互作用研究.pdf

1、腎臟有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體(OATs)表達(dá)在腎小管上皮細(xì)胞基底側(cè)或頂側(cè)，參與腎小管分泌或重吸收，是腎臟功能的重要組成部分。很多臨床上常用的治療藥物以及很多與疾病相關(guān)的內(nèi)源性化合物能夠與腎臟OATs發(fā)生相互作用。中藥大黃是我國(guó)著名的傳統(tǒng)中藥材，大黃中主要的活性成分為大黃蒽醌類化合物，包括大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚和大黃素甲醚等。文獻(xiàn)報(bào)道大黃酸在動(dòng)物腎臟組織中的濃度分布顯著高于其他組織器官。而大黃酸在生理?xiàng)l件下以陰離子形式存在，符合OAT

2、s的底物特性，因此推測(cè)大黃酸可能與腎臟OATs發(fā)生相互作用。此外，五種大黃蒽醌類化合物結(jié)構(gòu)相似，其他大黃蒽醌類化合物也可能與OATs發(fā)生相互作用。本課題對(duì)五種大黃蒽醌類化合物與腎臟OATs的相互作用進(jìn)行研究，主要就大黃蒽醌類化合物是否為OATs底物或抑制劑;大黃酸在腎臟高濃度分布是否與腎臟表達(dá)的OATs相關(guān);大黃蒽醌類化合物與腎臟OATs底物在動(dòng)物體內(nèi)是否能夠發(fā)生相互作用;大黃蒽醌類化合物與腎臟OATs相互作用是否具有應(yīng)用價(jià)值等科學(xué)問題

3、進(jìn)行探討，為大黃臨床合理用藥提供參考。在研究中發(fā)現(xiàn)，腸道外排轉(zhuǎn)運(yùn)體可能參與腎毒性O(shè)ATs底物馬兜鈴酸A(AAI)的腸道轉(zhuǎn)運(yùn)。本研究主要內(nèi)容包括：
　　第一部分：五種大黃蒽醌類化合物與hOAT1和hOAT3相互作用。應(yīng)用高表達(dá)hOAT1和hOAT3的細(xì)胞模型，研究了五種大黃蒽醌類化合物（大黃酸、大黃素、蘆薈大黃素、大黃酚和大黃素甲醚）與轉(zhuǎn)運(yùn)體的相互作用。結(jié)果顯示，五種大黃蒽醌類化合物對(duì)hOAT1和hOAT3均具有抑制作用，其中大黃酸

4、對(duì)hOAT1和hOAT3的抑制作用最強(qiáng)，其次是大黃素和蘆薈大黃素，大黃酚和大黃素甲醚對(duì)hOAT1和hOAT3的抑制作用較弱。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，抑制劑預(yù)孵育能夠增加某些大黃蒽醌類化合物對(duì)hOAT1或hOAT3的抑制作用，且抑制作用隨預(yù)孵育時(shí)間的延長(zhǎng)而增加。細(xì)胞積聚實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，五種大黃蒽醌類化合物均不是hOAT1或hOAT3的底物。
　　第二部分：大黃酸和大黃提取物對(duì)呋塞米大鼠藥物動(dòng)力學(xué)影響。為進(jìn)一步研究大黃蒽醌類化合物在體內(nèi)對(duì)腎臟O

5、ATs的抑制作用，我們研究了大黃酸和大黃提取物（單次或多次給藥后）對(duì)OATs底物呋塞米在大鼠體內(nèi)藥物動(dòng)力學(xué)的影響。合用大黃酸使呋塞米在大鼠體內(nèi)的AUC(0-t)增加了65％，平均駐留時(shí)間顯著增加，清除率和表觀分布容積顯著降低。合用大黃提取物（單次或多次給藥后），使呋塞米的AUC0-t值增加了32％和52％。說明大黃酸和大黃提取物能夠在動(dòng)物體內(nèi)抑制OATs，與OATs底物合用可能發(fā)生藥物相互作用。
　　第三部分：大黃酸和大黃提取物對(duì)

6、AAI及其去甲基代謝物大鼠藥物動(dòng)力學(xué)和組織分布影響。AAI為腎毒性物質(zhì)，也是腎臟OATs的底物。腎臟OATs攝取AAI進(jìn)入腎臟，介導(dǎo)AAI的腎臟毒性。我們研究了大黃酸和大黃提取物合用AAI，對(duì)AAI及其去甲基代謝物(AAIa)在大鼠體內(nèi)的藥物動(dòng)力學(xué)以及組織分布的影響。結(jié)果顯示，合用大黃酸使AAI和AAIa的AUC(0-t)增加了38％和31％。合用大黃提取物對(duì)AAI和AAIa的血藥濃度沒有顯著影響。但是合用大黃酸和大黃提取物，均顯著降低

7、AAI在腎臟的分布。在5min、10min和20min時(shí)間點(diǎn)，大黃酸使AAI在腎臟組織中濃度分別降低至對(duì)照組的50％、42％和58％，大黃提取物使AAI在腎臟組織中濃度分別降低至對(duì)照組的63％、58％和68％。
　　第四部分：AAI與腸道外排轉(zhuǎn)運(yùn)體相互作用。前期研究發(fā)現(xiàn)，AAI在Caco2細(xì)胞中雙向轉(zhuǎn)運(yùn)的外排率為5.8，大于2，說明有外排轉(zhuǎn)運(yùn)體參與AAI的外排轉(zhuǎn)運(yùn)。因此在高表達(dá)MDR1、MRP2和BCRP的細(xì)胞模型中，研究AAI與

8、這三種腸道主要表達(dá)的外排轉(zhuǎn)運(yùn)體之間相互作用。結(jié)果顯示，AAI不是P-gp底物，也不是MRP2底物，而是BCRP的底物。
　　第五部分：研究結(jié)果顯示，五種大黃蒽醌類化合物均為hOAT1和hOAT3的抑制劑，其中大黃酸對(duì)hOAT1和hOAT3的抑制作用最強(qiáng)。五種大黃蒽醌類化合物均不是hOAT1或hOAT3的底物，因此不能證明大黃酸在腎臟高濃度分布是否與腎臟表達(dá)的OATs相關(guān)。大黃酸和大黃提取物在體內(nèi)能夠與OATs底物呋塞米發(fā)生相互作用