基于HGF-c-Met信號通路探討中藥QHF復(fù)方對乳腺癌MCF-7細(xì)胞遷移侵襲的影響及機(jī)制.pdf

1、目的：研究中藥QHF復(fù)方對乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖、遷移、侵襲的影響及其可能的作用機(jī)制，為QHF的臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。
　　方法：（1）CCK8法檢測HGF、QHF對乳腺癌MCF-7細(xì)胞生長增殖的影響；并觀察中藥QHF復(fù)方對HGF促進(jìn)乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的拮抗作用。（2）細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)和Transwell實(shí)驗(yàn)檢測中藥QHF復(fù)方對乳腺癌MCF-7細(xì)胞運(yùn)動、遷移侵襲的影響；并采用c-Met抑制劑及其下游PI3K、ERK抑制劑干預(yù)乳

2、腺癌MCF-7細(xì)胞，檢測該HGF/c-Met及其下游PI3K/Akt、MAPK/ERK信號通路與乳腺癌MCF-7細(xì)胞遷移、侵襲的關(guān)系。（3）Western blot檢測中藥QHF復(fù)方對乳腺癌MCF-7細(xì)胞中HGF表達(dá)的影響；檢測中藥QHF復(fù)方、HGF及c-Met抑制劑對乳腺癌MCF-7細(xì)胞中c-Met、p-c-Met表達(dá)的影響；檢測中藥QHF復(fù)方、c-Met抑制劑及其下游PI3K、ERK抑制劑對乳腺癌 MCF-7細(xì)胞中 Akt、p-Ak

3、t、ERK、p-ERK及 VEGF、MMP-2、MMP-9表達(dá)的影響，探討中藥QHF復(fù)方通過影響HGF/c-Met及其下游信號通路抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞遷移、侵襲能力的具體機(jī)制。
　　結(jié)果：（1）CCK8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：HGF可不同程度促進(jìn)乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖，而中藥 QHF復(fù)方不但可不同程度抑制乳腺癌 MCF-7細(xì)胞增殖，還可顯著拮抗HGF(40ng/ml)對乳腺癌MCF-7細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用。（2）劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與對照

4、組相比，HGF組細(xì)胞運(yùn)動遷移距離明顯增長，而QHF組、c-Met抑制劑組及其下游PI3K、ERK抑制劑組細(xì)胞遷移距離明顯縮短；與HGF組比較，QHF與HGF共同干預(yù)組細(xì)胞遷移距離明顯縮短，提示HGF有促進(jìn)MCF-7細(xì)胞遷移的作用趨勢，并且這種作用趨勢可被中藥QHF復(fù)方拮抗；Transwell遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：與對照組相比，HGF組穿過濾膜的細(xì)胞數(shù)量明顯增多，而QHF組、c-Met抑制劑組及其下游PI3K、ERK抑制劑組穿過濾膜的細(xì)

5、胞數(shù)量均明顯減少；與HGF組比較，QHF與HGF共同干預(yù)組穿過濾膜的細(xì)胞數(shù)量明顯減少，提示HGF可促進(jìn)MCF-7細(xì)胞侵襲，且這種作用趨勢可被中藥QHF復(fù)方拮抗；QHF組與c-Met、PI3K、ERK抑制劑組比較，細(xì)胞的遷移與侵襲能力之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說明人乳腺癌MCF-7細(xì)胞的遷移侵襲可能與HGF/c-Met及其下游PI3K/Akt、MAPK/ERK信號通路的活化有關(guān)。（3） Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：中藥QHF復(fù)方可

6、明顯抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞中HGF及p-c-Met的表達(dá)（P<0.01）；HGF可促進(jìn)p-c-Met的表達(dá)，但是HGF的這種促進(jìn)作用可被中藥QHF復(fù)方拮抗（P<0.01）；中藥QHF復(fù)方可明顯抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞中p-Akt、p-ERK、VEGF、MMP-2、MMP-9的表達(dá)（P<0.01）；運(yùn)用 c-Met抑制劑后，其下游PI3K/Akt、MAPK/ERK通路中p-ERK、p-Akt、VEGF、MMP-2、MMP-9的表達(dá)明顯被

7、抑制（P<0.01）。各組中 Akt、ERK的表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：中藥QHF復(fù)方可抑制乳腺癌MCF-7細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲，這種作用可能是通過以下機(jī)制實(shí)現(xiàn)的：通過抑制HGF的旁分泌或自分泌，直接或間接地抑制其配體c-Met磷酸化，使HGF/c-Met信號通路失活，進(jìn)而抑制HGF/c-Met信號通路及下游MAPK/ERK信號通路和PI3K/Akt信號通路活化，最終通過抑制MMP-2、MMP-9和VE