三角帆蚌外套膜培養(yǎng)的改進及大型有核珍珠的培育.pdf

1、三角帆蚌(Hypriosiscumingii)，是我國最主要的淡水育珠蚌之一，其所產(chǎn)珍珠層厚，光澤鮮艷，細膩光滑，產(chǎn)珠質(zhì)量上乘，是淡水珍珠生產(chǎn)用的首選材料。目前我國淡水珍珠產(chǎn)量處于世界領先水平，但銷售額卻只占18％，出現(xiàn)嚴重產(chǎn)銷不平衡的問題，其中，所產(chǎn)淡水珍珠顆粒小、質(zhì)量低是導致這一問題的關鍵原因。為培育出大顆粒優(yōu)質(zhì)的淡水珍珠，本文從三角帆蚌外套膜細胞培養(yǎng)條件的優(yōu)化以及育珠的生產(chǎn)實踐兩方面進行了研究，主要結(jié)果如下：
　　 1、C

2、a2+和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)對三角帆蚌外套膜細胞培養(yǎng)的影響
　　 a)本試驗通過添加不同濃度梯度的Ca2+(0mmol/L，0.5mmol/L，1.25mmol/L，3mmol/L)，對體外培養(yǎng)的三角帆蚌外套膜細胞的堿性磷酸酶(ALP)活性和細胞增殖活力進行了測定。研究結(jié)果顯示，細胞增殖活力與ALP活性的變化趨勢大體相同：隨著Ca2+濃度的升高，細胞增殖活力與ALP活性也逐漸增高，在1.25mmol/L時達到最大，

3、3mmol/L時又有所降低。1.25mmol/LCa2+濃度組的ALP活性和細胞增殖活力與對照組相比均表現(xiàn)出顯著差異(P<0.05)，在顯微鏡下觀察到的細胞狀態(tài)及貼壁情況也明顯好于其它三組。從而得出1.25mmol/LCa2+濃度適合三角帆蚌外套膜細胞體外培養(yǎng)。
　　 b)本試驗通過添加不同濃度梯度的bFGF(0μg/L，0.3μg/L，0.6μg/L，0.9μg/L)，對體外培養(yǎng)的外套膜細胞的ALP活性和細胞增殖活力進行測定。

4、結(jié)果表明，細胞增殖活力與ALP的活性的變化趨勢有所不同：隨著bFGF濃度的升高，細胞增殖的活力也逐漸增高，在0.6μg/L時達到最大，0.9μg/L時又有明顯降低，表明了bFGF促進三角帆蚌外套膜細胞增殖的最適濃度為0.6μg/L，濃度過高反而會抑制外套膜細胞生長增殖；ALP的活性則隨著bFGF濃度的升高而逐步增高，0.9μg/L時ALP的活性為最高，表明ALP活性的bFGF最適濃度為最高0.9μg/L。同時顯微鏡觀察表明，各濃度的bF

5、GF對細胞形態(tài)及貼壁情況沒有顯著影響。
　　 2、改進細胞培養(yǎng)后進行內(nèi)臟團大型有核珍珠培育的研究
　　 為得到大顆粒優(yōu)質(zhì)的淡水有核珍珠，本試驗進行了游離細胞植入法在三角帆蚌內(nèi)臟團插核的生產(chǎn)育珠研究。實驗采用兩種培養(yǎng)基(培養(yǎng)基1、2)進行外套膜外膜細胞的培養(yǎng)，對不同培養(yǎng)時間(2、4、6、12h)的細胞增殖活力進行檢測，同時將處理過的珠核分別置于兩組細胞懸液中共培養(yǎng)，6h后采用內(nèi)臟團插核手術，對500只三角帆蚌進行插核，并進

6、行為期5個月的淡水有核珍珠生產(chǎn)實驗。
　　 實驗結(jié)果表明：兩種培養(yǎng)基的細胞增殖活力都隨培養(yǎng)時間逐漸增大，培養(yǎng)到6、12h時，兩種培養(yǎng)基的細胞增殖活力較2、4h時均有顯著提高(P<0.05)，6h與12h相比差異不顯著(P>0.05)；兩種培養(yǎng)基之間相比，在培養(yǎng)2h時兩組間細胞增殖活力沒有顯著差異(P>0.05)，而在培養(yǎng)4、6、12h時培養(yǎng)基2組的細胞增殖活力顯著高于培養(yǎng)基1組(P<0.05)。
　　 再通過用兩種兩種培

7、養(yǎng)基進行珍珠培育的結(jié)果來看，培養(yǎng)基2組培養(yǎng)的細胞孵育珠核6h后，貼附的細胞數(shù)量明顯增多且分布均勻，插核5個月后，形成了包裹完整、具有光澤、沉積0.8mm珍珠質(zhì)的大型珍珠；而采用培養(yǎng)基1組培養(yǎng)的外套膜細胞進行珠核孵育而后插核，得到的素珠較多，且沒有形成完整珍珠質(zhì)包被的珍珠。本實驗表明改進后的培養(yǎng)基有利于三角帆蚌外套膜細胞培養(yǎng)，從而有利于內(nèi)臟團有核珍珠的培育，這為進一步開展淡水貝類細胞培養(yǎng)的研究提供了實踐基礎，為大型有核珍珠的培育提供了依據(jù)