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1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文抗肺癌單鏈抗體偶聯(lián)綠色熒光蛋白基因的構(gòu)建及表達(dá)研究姓名:徐飛虎申請學(xué)位級別:碩士專業(yè):生物物理學(xué)指導(dǎo)教師:龔興國20030601卻夕亨破學(xué)碩士學(xué)位論文⑧AbstractUseof血eg佗ennuorescentprotein(GFP)ofAequoreaVictoriaasareporterhaSprovidedsensitivenew印proachesforrealtimemo血toringinliViIlgceI
2、IsMorearldmorereportshavedemonstratedthatwhenGFPfusedtotargetaIltibodyt量1ehostcellcanexpressbi脅ctio眥1如sionproteill,whichhasthenuorescemcharacterofGFPandtleantibodyactivi吼Asa11alteIna“vetoirnmllllofluorescence刪croscopy’t1
3、eexpressionofGFPgene如sionshasbeenusedfortumormoIlitorin島hi曲血rou曲putscreeningdrugsorresearchingmefunctionoftheacc印torofcenaincellf如toLInthisp印eraexpressionvectormatcontai璐GFPgenea11da11ti—JungcancerscFvgeneisconmuctFirst,
4、mev嘶ablere百onofheavychainandlightchainiscloned丘omcDNAs虹IrougllPCRThen,VLgeneisamplifiedandmodified謝也linkerp“mer,Equaim01eofVHandmodi士iedVLarethensubjectedt0sOEIigadona11dScFvgeneisamplifiedwitllVhbakandVlf0rSequcncingres
5、ultsindicatethatnopointmutationandfhmeslli茄ngmu伽onarebrou曲taboutd11ringPcR啪plification’11leGFPgeneisclonedintopPROEXHTbplasmidbetweenⅡ1eNcoI/)(baIsitesARermodifiedbyPCRusings~1andvlforprimerssothat也eamplmed曲舯entcontainsB
6、gllI脅oIsites,thePCRproductandt11erecombinantvectoraredigestedwimB百II十xhoI,廿1eInodifiedsc知geneisi11SertedintotheCtenn血alofGFPgenebet、vcenB西II,)(hoIsites,也entransfomingtherecombina工ltvectcrintoEcoliComparedtothenegativebac
7、衄aI,theconscnIctedplasmidgaveahiglllevclofexpressionsimil盯to也ean廿cipatedprotein出er口TGiIlducdonIt印pe盯stwosharppeaksⅡ1rou曲血epllri矗洲onofNi’NTA吲Il’meanalysisofSDSPAGEshowsthatoneofthemolecuIeweightof血ef詆ionproteitlissimilart
8、othetar伊tpmteinThehostcellsfluorescebrightgreenllllder396mwavelen血,itmeallsmegenehasexpressedinthecells,but、vhemertlleta曙etpmteinhas恤ebi0109icalfhlctionneedsfhrtherresearchKeyw。rds:ScFvGFPmolecuIemarkerprokaryoticexpress
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