三種生物活性篩選模型的引建及其在天然產(chǎn)物篩選中的應(yīng)用.pdf

1、本論文主要由四章組成。第一章主要介紹了抗腫瘤活性篩選模型CCLT的引建及其在化合物樣品批量篩選和中甸鳳仙的活性追蹤分離中的應(yīng)用。第二章主要介紹了抗骨質(zhì)疏松活性篩選模型CA-Ⅱ模型在天然植物樣品篩選中的應(yīng)用。第三章主要介紹了抗真菌活性篩選模型YNG在天然植物樣品篩選中的應(yīng)用。第四章主要綜述了近年來(lái)抗骨質(zhì)疏松藥物篩選方法的一些進(jìn)展。共計(jì)篩選了7589個(gè)樣品（化合物3005個(gè)，提取物4584個(gè)），發(fā)現(xiàn)了354個(gè)活性樣品（化合物97個(gè)，提取物2

2、57個(gè)）。其中抗腫瘤活性樣品87個(gè)，抗骨質(zhì)疏松活性樣品100個(gè)，抗真菌活性樣品167個(gè)。特別是8個(gè)化合物樣品具有較強(qiáng)的抗腫瘤活性（IC50<2.5μg/ml），4個(gè)提取物或分離部位樣品具有較強(qiáng)的抗骨質(zhì)疏松活性（IC50<2.5μg/ml），1個(gè)化合物樣品和2個(gè)提取物或分離部位樣品具有較強(qiáng)的抗真菌活性（IC50<2μg/ml）。 論文還對(duì)這些活性樣品的結(jié)構(gòu)和活性、來(lái)源與活性的關(guān)系進(jìn)行了探討。這些研究為活性化合物的進(jìn)一步藥效研究和活

3、性提取物或分離部位的活性追蹤分離提供了重要依據(jù)。 同時(shí)中甸鳳仙經(jīng)CCLT的模型活性檢測(cè)指導(dǎo)下的分離，很快發(fā)現(xiàn)了主要的抗腫瘤活性成分200211202（IC50=9.57μM），活性較強(qiáng)，有潛在研發(fā)價(jià)值。 通過(guò)以上工作發(fā)現(xiàn)這三個(gè)體外篩選模型CCLT、CA-Ⅱ、YNG具有快速、微量、簡(jiǎn)便、高效、穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，特別適合于樣品的批量篩選。下面簡(jiǎn)要介紹各章內(nèi)容： 第一章 抗腫瘤活性篩選模型CCLT的引建及其應(yīng)用 C

4、CLT模型是通過(guò)腫瘤細(xì)胞培養(yǎng)進(jìn)行藥物細(xì)胞毒性檢測(cè)篩選抗腫瘤藥物的方法。我們主要通過(guò)人非小細(xì)胞性肺癌細(xì)胞株A549培養(yǎng)，對(duì)1571個(gè)植物來(lái)源的化合物樣品進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測(cè)，希望能夠發(fā)現(xiàn)對(duì)該細(xì)胞生長(zhǎng)有較好抑制作用的化合物；并對(duì)中甸鳳仙的各個(gè)提取或分離部位進(jìn)行細(xì)胞毒性檢測(cè)，以此指導(dǎo)各步分離工作，希望能從該植物提取物中尋找到抗癌作用較好的成分。 我們參照美國(guó)NCI和中科院上海藥物研究所的抗腫瘤細(xì)胞毒性模型篩選方法，經(jīng)過(guò)一系列的條件優(yōu)化，建

5、立了CCLT模型，并對(duì)1571個(gè)植物來(lái)源的化合物樣品進(jìn)行了批量篩選。經(jīng)過(guò)初篩后選取抑制率最高的前92個(gè)樣品進(jìn)行了評(píng)估；經(jīng)過(guò)評(píng)估后，共發(fā)現(xiàn)82個(gè)活性化合物（IC50值低于10μg/ml），其中活性較好的3個(gè)化合物的IC50值小于1μg/ml，IC50值介于1-2.5μg/ml之間的樣品5個(gè)，介于2.5-5μg/ml之間的樣品有59個(gè)，介于5-7.5μg/ml之間的樣品共10個(gè)，介于7.5-10μg/ml之間的樣品共5個(gè)，并對(duì)這些活性化合物

6、進(jìn)行了結(jié)構(gòu)與活性的分析。 在對(duì)中甸鳳仙的活性追蹤分離過(guò)程中，對(duì)其粗提取、不同溶劑萃取部位和柱分離部位分離及其得到的成分共計(jì)36個(gè)樣品進(jìn)行了A549細(xì)胞株的抗腫瘤活性檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)了8個(gè)抗腫瘤活性樣品，其中包括了抗腫瘤活性最強(qiáng)的化合物200211202，其IC50值為9.57μM。 第二章 抗骨質(zhì)疏松活性篩選模型CA-Ⅱ的批量篩選 CA-Ⅱ模型是以破骨細(xì)胞內(nèi)含量豐富且對(duì)骨吸收起重要作用的碳酸酐酶Ⅱ作為靶點(diǎn)的體外篩選方

7、法。我們希望通過(guò)尋找該酶的抑制劑來(lái)尋找治療骨質(zhì)疏松癥的藥物。該實(shí)驗(yàn)以樣品對(duì)該酶催化其底物PNPA的酯鍵水解程度的影響來(lái)評(píng)價(jià)樣品對(duì)該酶的抑制或促進(jìn)作用。在進(jìn)一步條件優(yōu)化的基礎(chǔ)上對(duì)主要來(lái)源于植物的天然產(chǎn)物樣品進(jìn)行了批量篩選，包括2840個(gè)提取物或分離部位樣品及243個(gè)化合物樣品，經(jīng)過(guò)初篩、復(fù)篩和評(píng)估，共發(fā)現(xiàn)了96個(gè)提取物或分離部位樣品的IC50值低于10mg/ml，4個(gè)化合物樣品的IC50值低于12.5mg/ml，并探討了這些活性樣品的結(jié)構(gòu)

8、與活性、來(lái)源與活性的關(guān)系。 第三章 抗真菌活性篩選模型YNG的批量篩選 YNG模型是對(duì)常見(jiàn)的三種具有代表性的條件致病菌即白色念珠菌、光滑念珠菌和煙熏曲霉菌在藥物存在下培養(yǎng)并檢測(cè)樣品對(duì)真菌的抑制程度來(lái)篩選抗真菌藥物的方法。我們希望通過(guò)篩選能找到對(duì)這三種條件致病真菌生長(zhǎng)產(chǎn)生抑制作用的樣品。我們對(duì)這幾種致病菌在一定時(shí)間內(nèi)與藥物一同培養(yǎng)，通過(guò)直接比濁或間接觀察細(xì)胞對(duì)染料的分解程度來(lái)檢測(cè)這些真菌生長(zhǎng)狀況，評(píng)價(jià)樣品的抗真菌活性。

9、 通過(guò)對(duì)這些真菌的培養(yǎng)，在CA-YNG模型中對(duì)329個(gè)提取物、242個(gè)化合物進(jìn)行了篩選，在CA-BSA-YNG模型中對(duì)329個(gè)提取物、246個(gè)化合物進(jìn)行了篩選，在CG-YNG模型中對(duì)732個(gè)提取物、462個(gè)化合物進(jìn)行了篩選，在AF-YNG模型中對(duì)329個(gè)提取物、241個(gè)化合物進(jìn)行了篩選，累計(jì)篩選了2910個(gè)樣品。發(fā)現(xiàn)了對(duì)CA菌株具有抑制活性的樣品9個(gè)，其中6個(gè)提取物（IC50<16μg/ml）、3個(gè)化合物（IC50<4μg/ml）

10、；對(duì)CG菌株具有抑制活性樣品共158個(gè)，其中150個(gè)提取物（IC50<16μg/ml）、8個(gè)化合物（IC50<4μg/ml），對(duì)BSA存在下CA菌株未發(fā)現(xiàn)具有抑制活性的樣品，對(duì)AF菌株也未發(fā)現(xiàn)具有抑制活性的樣品，共發(fā)現(xiàn)有活性的樣品167個(gè)，其中11個(gè)化合物、156個(gè)提取物。并對(duì)這些活性樣品的結(jié)構(gòu)與活性、來(lái)源與活性進(jìn)行了分析。 第四章 抗骨質(zhì)疏松藥物活性篩選方法進(jìn)展 本章綜述了抗骨質(zhì)疏松藥物活性篩選方法在整體和離體動(dòng)物模