卵母細(xì)胞獲得成熟潛能的溫度依賴性機(jī)制中cdc25和mos的表達(dá)與作用分析.pdf

1、該實(shí)驗(yàn)室過(guò)去的工作證實(shí):低溫是中華大蟾蜍卵母細(xì)胞獲得成熟潛能的關(guān)鍵;孕酮處理后的高溫卵雖無(wú)能成熟卻發(fā)生了成熟過(guò)程早期階段的變化,如孕酮刺激導(dǎo)致胞內(nèi)cAMP濃度下降,Ca<'2+>濃度上升等,但成熟促進(jìn)因子(maturation promoting factor,MPF)未被激活;有活性的MPF注入高溫卵中無(wú)法自催化擴(kuò)增;孕酮刺激高溫卵后,細(xì)胞質(zhì)中無(wú)MPF,但注入低溫卵中卻能促使卵成熟.這些結(jié)果表明在中華大蟾蜍高溫卵中或者M(jìn)PF組分存在缺

2、失,或者M(jìn)PF自催化擴(kuò)增循環(huán)中的組分存在缺失,再或者孕酮誘導(dǎo)MPF活化的信號(hào)通路中被阻斷,而導(dǎo)致高溫卵不具備成熟潛能.孕酮誘導(dǎo)卵母細(xì)胞成熟的信號(hào)通路中,c-Mos蛋白的新合成被證實(shí)是孕酮誘導(dǎo)卵母細(xì)胞成熟所必需,它激活MAPK并誘導(dǎo)一連串激酶的級(jí)聯(lián)效應(yīng)最終激活MPF,是位于信號(hào)通路上游的關(guān)鍵分子.因此該文就c-Mos在中華大蟾蜍高溫卵和低溫卵中的表達(dá)水平進(jìn)行了分析,結(jié)果顯示c-mos在兩種卵中的表達(dá)沒(méi)有差異,也就排除了c-Mos影響高溫卵

3、喪失成熟潛能的可能性.已知MPF由催化亞單位p34<'cdc2>(CDK1)及調(diào)節(jié)亞單位Cyclin B組成,在經(jīng)歷了量的積累,兩亞單位的結(jié)合,磷酸化和去磷酸化后才完全活化.CDC25是一種雙特異性磷酸酶,在細(xì)胞周期過(guò)程中,它完成針對(duì)CDK1的14位Thr和15位Tyr的去磷酸化,從而使CDK1完全活化.活化后的CDK1又通過(guò)級(jí)聯(lián)反應(yīng)磷酸化和活化CDC25,參與MPF自催化擴(kuò)增循環(huán).因此作為MPF自擴(kuò)增循環(huán)重要組分之一,有必要了解高溫卵

4、和低溫卵中cdc25的表達(dá)情況.該文利用簡(jiǎn)并引物結(jié)合RACE的方法克隆到中華大蟾蜍cdc25基因全長(zhǎng)cDNA序列并登錄了GenBank,序列號(hào)為AY491052.其演繹的氨基酸序列經(jīng)過(guò)blastp進(jìn)行蛋白序列同源性分析后,結(jié)果表明其與已經(jīng)克隆的非洲爪蟾CDC25A同源性最高,一致性高達(dá)67﹪,而與人和鼠的CDC25A也具有高于50﹪的一致性和高于60﹪的相似性,且C端功能結(jié)構(gòu)域的同源性更高,因此我們將其暫定名為tcdc25A.隨后運(yùn)用N