HBx在肝癌細胞p53依賴性和非依賴性凋亡通路中的作用靶點.pdf

1、目的:該研究主要通過觀察HBx對肝癌細胞生長的影響及其對p53及p53上下游基因p21<'WAF1>及p14ARF的作用,探討HBx在依賴性及非依賴性p53凋亡通路中的作用靶點,對進一步闡明肝細胞癌的發(fā)生機制具有理論意義.方法:1、用HBx及HBx<,3'-40>(去除羧基末端40個氨基酸)轉(zhuǎn)染肝癌細胞SMMC-7721,用流式細胞儀分析檢測對細胞凋亡的影響,并用氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶(CAT)-ELISA方法檢測HBx的反式激活作用,以及繪

2、制細胞生長曲線、平板克隆形成試驗、裸鼠成瘤試驗觀察HBx及HBx<,3'-40>對SMMC-7721細胞生長的影響.并用Western免疫印跡方法觀察不同肝癌細胞株的p14ARF、MDM2、p53、p21<'WAF1>蛋白的表達水平.2、通過構(gòu)建正、反義野生型p53與HBx、HBx<,3'-40>共轉(zhuǎn)染SMMC-7721細胞及將HBx轉(zhuǎn)染入不同p53狀態(tài)的肝癌細胞株,來觀察細胞凋亡、細胞周期、含p53結(jié)合位點p21<'WAF1>啟動子熒

3、光素酶活性并用Western免疫印跡方法比較p53、p21<'WAF1>表達水平的變化,分析HBx對p53及下游基因p21<'WAF1>的影響及其與肝癌細胞生長影響之間的關(guān)系.3、將HBx及p14ARF單轉(zhuǎn)染及共轉(zhuǎn)染含野生型p53但不表達p14ARF的肝癌細胞株HepG2,通過比較細胞凋亡、細胞周期、含p53結(jié)合位點p21<'WAF1>啟動子熒光素酶活性,并用Western免疫印跡方法比較p14ARF、MDM2、p53、p21<'WAF