體外成熟過程中綿羊卵母細胞組蛋白乙?；蜕窖蚵涯讣毎€粒體的動態(tài)變化.pdf

1、卵母細胞是生命延續(xù)之本，卵母細胞的成熟是一個復雜的過程。大多數(shù)哺乳動物的卵母細胞的減數(shù)分裂開始于胚胎早期，在出生前后分裂至雙線期便進入休止期。在體外培養(yǎng)的環(huán)境中，從卵巢卵泡內獲得的長足卵母細胞自發(fā)的恢復第一次減數(shù)分裂逐步成熟，期間的標志性事件是：生發(fā)泡的破裂，染色質的凝集，紡錘體的組裝，第一極體的排放。完成第一次減數(shù)分裂后至受精前，卵母細胞停滯在第二次減數(shù)分裂期。受精后，卵母細胞排出第二極體完成第二次減數(shù)分裂。在卵母細胞內雌雄原核形成并

2、且發(fā)生變化，開始早期的胚胎發(fā)育。 卵母細胞的成熟是一個及其復雜的變化過程，分為核成熟和胞質成熟兩大基本過程。卵丘細胞、透明帶、細胞質和細胞核發(fā)生一系列的結構和分子方面的變化，完成卵丘細胞的擴散、核的成熟和胞質的成熟。在胞質成熟方面，如線粒體的激活與遷移、遺傳物質等細胞器以及細胞內的生化物質也隨著改變，從而保障胚胎的早期發(fā)育。最后卵泡破裂排出具備受精和發(fā)育能力卵母細胞。 實驗一綿羊卵母細胞體外成熟過程中組蛋白乙?；膭討B(tài)變

3、化組蛋白乙?；诓煌愋偷募毎l(fā)育過程中存在不同的變化，甚至在不同動物的同一類型細胞中的變化也存在一定的差別。在綿羊卵母細胞體外成熟過程中，為了探討組蛋白H3/K9、H4/K5和H4/K12乙酰化的詳細變化規(guī)律，我們應用H3/K9、H4/K5和H4/K12的抗體分別檢測，并通過核磁激光共聚焦顯微鏡進行觀測研究。試驗結果：H3/K9和H4/K12在生發(fā)泡期、生發(fā)泡晚期以及生發(fā)泡破裂期染色質的抗體表達顯著，在第一次減數(shù)分裂中期的抗體表達減弱

4、；但是隨著卵母細胞進一步發(fā)育到中后期和第二次減數(shù)分裂中期，抗體的表達又變強，并且在第一極體中可以檢測到抗體的存在。H4/K5的抗體表達最早出現(xiàn)在第一次減數(shù)分裂中期，隨著細胞發(fā)育到中后期其表達效應加強；但是發(fā)育到第二次減數(shù)分裂中期，卵母細胞及第一極體中H4/K5的抗體表達不明顯，甚至檢測不到。 實驗二山羊卵母細胞體外成熟過程中線粒體的動態(tài)分布應用激光共聚焦掃描技術，研究山羊卵母細胞減數(shù)分裂過程中線粒體的動態(tài)分布。收集的山羊卵母細胞

5、在M199中分別培養(yǎng)4h、8h、12h、16h、20h和24h，用特異性線粒體標記探針(Mito Tracker Green，綠色)進行標記，用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察線粒體的分布情況。結果表明：生發(fā)泡(germinal vesicle，GV)期線粒體多分散在卵母細胞的胞質內，并且距生發(fā)泡有一定的距離；生發(fā)泡破裂(germinal vesicle breakdown，GVBD)期線粒體逐漸移向染色質；第一次減數(shù)分裂中期(MⅠ)與第二次減